解园星 王文锋 田红燕

    糖尿病性心肌病(diabetic cardiomyopathy，DCM)是糖尿病的常见并发症之一，多发于老年人，已成为引起老年人死亡的重要原因之一[1]。研究发现，DCM患者脂代谢异常、葡萄糖自身氧化及线粒体氧化等过程均可促进活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)聚集及氧化应激反应激活，导致DCM患者心肌细胞氧化应激损伤及过度凋亡，甚至心力衰竭的发生[2]。阿昔莫司为烟酸衍生物，是临床常用的调脂、降脂药[3]，可用于冠心病[4]、糖尿病伴血脂异常的治疗[5]。但阿昔莫司是否能应用DCM治疗，其对高糖诱导的心肌细胞损伤是否有保护作用，笔者还未见报道。本研究用高糖条件，体外培养心肌细胞模拟DCM模型，从氧化应激方面探讨其对心肌细胞保护作用机制，以期为阿昔莫司在DCM领域的治疗提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 细胞及主要试剂与仪器 大鼠心肌H9C2细胞(购自上海明舟生物科技有限公司，产品编号：MZ-2622)。DMEM培养基(北京索莱宝科技有限公司，货号：90113)；阿昔莫司(上海玉博生物科技有限公司，货号：CP-100750)；MTT试剂盒(北京索莱宝科技有限公司，货号：M1020)；活性氧簇(ROS)免疫荧光探针试剂盒(美国abcam公司，货号：ab62623)；超氧化物歧化酶(SOD)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、活性氧簇(ROS)、抗氧化酶超氧化物歧化酶2(SOD2)、脂质过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、心肌细胞脂质代谢相关指标-细胞膜糖蛋白(CD36)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)一抗(美国abcam公司，货号：ab83108、ab91606、ab189925、ab68155、ab272718、ab256470、ab32572、ab252922、ab188317)；荧光显微镜(型号：BX63，日本奥林巴斯公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及处理:取大鼠心肌H9C2细胞株，常规复苏后，用DMEM/F12培养液(含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 mg/L链霉素)，进行常规传代培养。取对数期细胞，按1×105个/ml密度接种于6孔板中，并进行如下处理：①对照组、低糖组、等渗组、高糖组，对照组采用正常培养基培养，低糖组及高糖组分别加入终浓度为5.6 mmol/L、30.0 mmol/L葡萄糖培养，等渗组在低糖组基础上加入24.4 mmol/L甘露醇培养 ......