张伟东 张伟威 党晓健 魏颖 王莉 李静 王娜

    胸腺作为免疫系统的主要调控器官，功能状态直接决定机体细胞免疫功能，此外还有维持自身免疫、免疫调节及屏障保护等功能。胸腺本身也极易受到损害，众多引起胸腺衰老因素中，年龄是公认的主要因素，即“胸腺增龄性萎缩(age-related thymic involation)”[1]。但实际临床工作中放化疗药物通常被认为是损害胸腺最大因素，通过胸腺双阳性T细胞巨大杀伤性作用，使胸腺细胞大量死亡与空竭，这也是引起胸腺皮质及髓质结构的破坏，直接引起T细胞生存环境受损的主要因素[2]。最终引起免疫系统自我修复能力显著降低，最终引起此类患者感染及肿瘤复发率高于普通人群，甚至引发严重感染或二次肿瘤。脂肪源性间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)属干细胞家族，源于发育早期中胚层/外胚层，属多能干细胞，具备多分化潜能。ADSCs在全身脂肪组织均有分布，临床可通过吸脂手术获得，取材简便，创伤小。研究发现ADSCs因其多分化潜能生物特性广泛应用于临床治疗，如自体ADSCs软组织缺损修复，在心肌缺血及神经退行性病变治疗应用等[3]。既往不断有研究证实ADSCs对经放化疗照射小鼠胸腺上皮细胞有再生修复增殖作用[4]，但迄今缺乏相关机制报道及体外人体细胞模型相关研究。因此，本研究基于ADSCs生物学特性及既往临床应用研究基础，以人脂肪源ADSCs作为体外细胞研究模型，观察其对化疗损伤后胸腺上皮细胞增殖修复作用并对其进行机制探讨，为临床应用提供科学理论指导。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞标本来源:提取细胞脂肪组织由我院普外科手术切除废弃脂肪组织提供，用含硫酸庆大霉素0.9%氯化钠溶液充分冲洗切除组织后放置PBS液中，于 30 min内送至实验室。入选供体均知情同意并签署知情同意书，获得医院伦理委员会批准。小鼠胸腺上皮细胞源于北京大学医学部免疫教研室赠送。

    1.1.2 主要仪器与试剂:①仪器：恒温饱和湿度CO2培养箱(赛默飞世尔科技有限公司)，酶标仪(美国伯乐公司)，Rotor-Gene QPCR仪(德国凯杰公司)，荧光倒置显微镜(BX51，日本Olympus公司)，流式细胞仪(美国BD公司)，旋涡离心机(北京医疗设备厂)，MUSE 细胞分析仪(德国 Merk Millipore公司),Megafuge 离心机(美国Thermo Scientific公司)。②实验试剂：OPTI-MEM培养基/胎牛血清/胰蛋白酶/P/S双抗(GIBCO公司) ......