王齐 罗松 李亮

    急性肺损伤(acute lung injury，ALI)是一种严重肺部炎症性疾病，其病理特征主要为肺泡上皮细胞损伤，其病情进展迅速，死亡率高达30%～40%，是重症监护室患者死亡最主要的原因之一，目前尚无确切疗效的治疗药物，因此，寻找ALI的治疗药物、研究其作用机制对改善ALI患者的预后具有重要意义[1,2]。褪黑素是一种内源性神经激素，具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等多种药理学作用，可参与调控多种炎症性疾病[3]。研究显示，褪黑素可减轻脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤，但是褪黑素对减轻ALI的具体作用机制尚不清楚[4]。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3)炎性小体是一种蛋白质复合物，可激活天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)，形成NLRP3/caspase-1信号通路，该通路的激活参与ALI的炎性反应[5]。但是，目前NLRP3/caspase-1信号通路在褪黑素对LPS诱导的A549细胞中的作用尚不清楚。因此，本研究通过观察褪黑素对LPS诱导的A549细胞凋亡及NLRP3/caspase-1通路的影响，初步探索褪黑素对LPS诱导的A549细胞损伤机制。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 人肺泡上皮细胞(A549)购自中科院上海细胞库，褪黑素、噻唑蓝(MTT)试剂盒、LPS购自美国Sigma公司；MCC950购自美国MedChem Express公司；DMEM培养基购自美国Gibco公司；TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司；反转录试剂盒、qRT-PCR试剂盒购自大连宝生物科技有限公司；NLRP3、caspase-1及内参GAPDH引物由上海生工生物工程科技有限公司设计与合成；人肿瘤坏死因子-α(TNF-α) ELISA试剂盒、白介素-1β(IL-1β)ELISA试剂盒、IL-6 ELISA试剂盒购自美国Elabscience公司；Annexin V-FITC/PI试剂盒、BCA蛋白检测试剂盒、RIPA裂解液、辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔、羊抗鼠二抗购自上海碧云天生物技术有限公司；兔抗人NLRP3、caspase-1和鼠抗人β-actin单克隆抗体购自美国Abcam公司 ......