刘秀竹 刘鸿渊 李宗平 廖英 王晓毅

    氧化应激诱导的神经细胞损伤是神经退行性疾病的重要发病机制，影响神经退行性疾病的进展[1,2]。因此，抑制神经细胞氧化应激损伤对治疗相关疾病具有重要意义。研究表明lncRNA在神经系统及神经系统疾病中具有重要作用[3]。叉头框转录因子D3反义RNA 1(forkhead box D3 antisense RNA 1,FOXD3-AS1)是一种lncRNA，研究报道氧葡萄糖剥夺/复氧后N2a细胞中FOXD3-AS1上调，FOXD3-AS1敲低可通过miR-765/BCL2L13轴防止脑缺血/再灌注损伤[4]。FOXD3-AS1过表达可通过促进自噬加重心肌细胞的缺血/再灌注损伤[5]。然而FOXD3-AS1对过氧化氢(H2O2)作用的神经细胞损伤的影响及机制尚不清楚。miR-335-3p是一种富含神经元的microRNA，与神经系统疾病有关；研究报道敲除circTLK1通过miR-335-3p/TIPARP可以显著减少梗死体积，减轻神经元损伤并改善神经功能缺损[6]。H2O2诱导的HLE-B3细胞氧化应激模型中miR-335-3p下调表达[7]。但miR-335-3p在H2O2作用的神经细胞中的表达及作用尚不清楚。研究表明，10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)在神经保护和神经元再生中起重要作用，抑制PTEN表达有益于周围神经损伤后的神经再生和功能恢复[8]。甘氨酸通过PTEN/Akt信号通路减轻大鼠脑出血损伤[9]。生物学软件预测发现FOXD3-AS1与miR-335-3p有结合位点，miR-335-3p与PTEN有结合位点，但其之间的关系尚不清楚。本实验旨在研究FOXD3-AS1对H2O2作用的神经细胞损伤的影响及机制是否与miR-335-3p和PTEN相关。

    1 材料与方法

    1.1 材料 PC12细胞(美国ATCC)；DMEM培养基(美国GIBCO)；H2O2(上海钰博生物)；Trizol试剂(南京森贝伽生物)；SYBR Premix ExTaqTM试剂盒(武汉科昊佳生物)；RIPA蛋白裂解液(上海北诺生物)；MTT试剂盒(大连美仑生物)；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒(上海贝博生物)；CAT、SOD活性检测试剂盒、MDA含量检测试剂盒(上海研卉生物)；双荧光素酶报告基因检测试剂盒(上海翌圣生物) ......