郭亮 余新建

    心肌细胞的凋亡参与了许多心血管疾病的发生，发展过程，而氧化应激增加能激活心肌细胞凋亡[1,2]。因此，抑制心肌细胞损伤有利于心血管疾病的治疗。研究表明非编码RNA在心血管疾病相关的细胞死亡中发挥至关重要的作用[3]。盲肌样蛋白1反义RNA1(MBNL1-AS1)是一种lncRNA，研究报道MBNL1-AS1的下调通过靶向KCNMA1，保护了七氟醚预处理的小鼠免于缺血再灌注损伤[4]。研究报道敲低PVT1可通过上调miR-135a-5p来减轻缺氧引起的H9c2细胞损伤[5]。在大鼠原代心肌细胞中，沉默circArhgap12通过海绵miR-135a-5p促进细胞凋亡和氧化应激[6]。Krüppel样因子4(KLF4)是一种锌指结构转录因子，研究报道miR-506和miR-214的过表达通过抑制KLF4和KLF5的表达对H2O2引起的心肌损伤具有保护作用[7]。SNHG14通过在体外调节miR-25-3p/KLF4轴来保护H9c2细胞免受缺氧诱导的损伤[8]。而MBNL1-AS1是否通过调控miR-135a-5p及KLF4影响心肌损伤尚不清楚。因此，本实验用H2O2用处理心肌细胞H9C2，研究MBNL1-AS1对心肌细胞损伤的影响及机制是否与miR-135a-5p和KLF4有关。

    1 材料与方法

    1.1 试剂材料 H9C2细胞(美国ATCC；DMEM培养基美国Hyclone公司；过氧化氢(H2O2)溶液购自上海经科化学科技有限公司；荧光定量试剂盒购自日本Takara；蛋白提取试剂盒购自美国Invent公司；凋亡检测试剂盒购自日本同仁研究所；MDA含量及SOD活性检测试剂盒购自上海信裕生物科技有限公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国AAT Bioquest 公司。

    1.2 细胞处理与分组 H9C2细胞用DMEM培养基培养 ......