唐娟 黄碧来 高丽玲

    子宫肌瘤是一种由子宫平滑肌细胞增生诱发的良性肿瘤[1,2]，作为一种女性特有的疾病，子宫肌瘤发病率连年上升，患者大多临床表现为腹部包块、疼痛、子宫出血等，严重影响患者身体健康、生活质量[3,4]。据相关流行病学调查数据显示，子宫肌瘤发病率与年龄具有一定相关性，绝经期女性发病率高达50%左右[5]。临床常用的治疗子宫肌瘤的手段包括手术治疗、药物治疗等。部分子宫肌瘤患者因心理、生育需求等因素，不愿接受手术治疗，但是目前临床尚无一种特效的治疗子宫肌瘤的药物，子宫肌瘤发病机制、新治疗靶点探究成为许多专家的新的研究方向[6,7]。本文研究中设计实验，靶向调控子宫肌瘤细胞微小RNA-197(miR-197)表达，探究调控miR-197对子宫肌瘤细胞侵袭、迁移的影响及相关机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 研究细胞：子宫肌瘤细胞(中国医学科学院)。主要试剂：小鼠抗兔miR-197、CD82抗体(BD公司)；大鼠抗兔Wnt3a、β-catenin抗体(Selleck公司)；兔抗小鼠MMP-2、MMP-9抗体(Hyclone公司)；小鼠抗大鼠Beclin-1抗体(Gibco公司)；大鼠抗小鼠LC3-Ⅱ抗体(Sigma公司)；小鼠抗大鼠CyclinD1抗体(Invitrogen公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：将子宫肌瘤细胞置于含10%胎牛血清的培养基中进行培养，将培养基置于37℃恒温箱(5% CO2)中，培养至细胞密度达90%，胰蛋白酶消化传代。

    1.2.2 细胞分组干预：miR-197引物：5’-CAGUACUUUUGUGUAGUACAA-3’。Eco31Ⅰ酶切线性化质粒pGenesil-1，稀释退火产物后相连接，使用大肠杆菌DH5α进行转化，20℃环境下过夜 ......