康树宏 吕峰 韩继明

    竹茹具有涤痰开郁、清热止呕的功效，在多种方剂中可见。现代药理证实，竹茹中含有多种有效成分，如丁香醛、苜蓿素等，进而发挥药效，起到治疗疾病的目的[1]。食管癌属于常见消化道恶性肿瘤，多数患者术后可以获得良好预后，但是仍有少数患者会出现肿瘤复发或转移情况[2]。有报道指出，Gas6/Ax1信号通路在食管癌进展中起关键性作用，认为调控Gas6/Axl通路可对食管癌细胞迁移、侵袭产生抑制[3]。目前临床关于竹茹抗癌治疗的研究笔者所见并不多，仅有少量学者认为竹茹不仅具有抑菌作用，对癌细胞增殖同样可以起到抑制作用[4]。本研究通过制取竹茹提取液对食管癌细胞进行干预，分析竹茹对食管癌细胞迁移、侵袭能力及Gas6/Axl通路相关蛋白的影响，进一步证实竹茹是否存在抗癌价值。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    1.1.1 组织样本:选取第四军医大学2019年1月至2020年12月接受食管癌切除手术患者术后组织样本，分别获取20例患者食管癌组织及癌旁组织。

    1.1.2 细胞株:人源鳞状食管癌细胞株ECA109和TE1，由武汉尚恩生物技术有限公司提供。

    1.1.3 药物制备:竹茹购于北京同仁堂有限公司，并经专家鉴定。首先对竹茹进行称重，粉碎后加入适量水浸泡，煎煮成药液，过滤后悬蒸，待药液粘稠后进行冷冻处理，制成竹茹冻干粉，之后制备100 μg/ml、200 μg/ml含竹茹培养基，4℃保存备用。

    1.1.4 实验试剂:PBS缓冲剂、蛋白酶抑制剂(BI，以色列)，羊抗兔二抗、羊抗鼠二抗、Ax1抗兔一抗(Rockland，美国)，Gas6一抗(Sigma，美国)，胰蛋白酶、培养基(Gibco，美国)，PVDF膜(Millipore，美国)，胎牛血清(BI，以色列)等。

    1.1.5 实验仪器:显微镜(尼康，日本)，匀浆机(新芝公司)，水浴箱(上海赫田科学仪器有限公司)，电化学发光仪(罗氏，瑞士)，生化检测分析仪(日立，日本)，离心机(华东公司)，电泳仪(Bio-Rad，美国)，数字天平、切片机等。

    1.2 方法

    1.2.1 HE染色:取未经放化疗干预的食管癌组织及癌旁组织，其中癌旁组织作为对照组，食管癌组织根据干预药物浓度不同分为竹茹低剂量组(100 μg/ml)、竹茹高剂量组(200 μg/ml)，经脱蜡、水化处理 ......