胡倩 赵嘉英 严宏莉

    类风湿关节炎是一种慢性炎症性疾病，其主要病理特征表现为滑膜细胞增殖、炎性细胞浸润及关节软骨破坏等[1]。类风湿关节炎滑膜组织中的成纤维样滑膜细胞是滑膜炎性增生的主要效应细胞，在类风湿关节炎的发生发展中起重要作用[2]。研究显示，抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增生和炎性反应可有效阻碍滑膜炎症及增生，延缓类风湿关节炎的发展进程。羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是中药红花的主要活性成分之一，具有抗炎、镇痛和抗肿瘤等功效[3-5]。研究显示，羟基红花黄色素A可能通过抑制Notch信号通路减少骨关节炎大鼠体内TNF-α、IL-1β和IL-6等炎性因子的表达，减轻软骨损伤[6]；羟基红花黄色素A可减轻H2O2诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤[7]。然而，羟基红花黄色素A能否影响类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞损伤还未知。研究显示，miR-20a-5p在糖尿病性心肌病(DCM)大鼠心肌组织和高糖诱导的心肌细胞H9C2中表达降低，上调miR-20a-5p可改善DCM大鼠心脏功能，减少心肌细胞凋亡，并抑制心肌细胞炎性反应，miR-20a-5p有可能成为DCM治疗的分子靶点[8]；miR-20a-5p在卵白蛋白(OVA)诱发的哮喘小鼠肺组织中呈低表达，过表达miR-20a-5p可通过靶向抑制ATG7表达减少哮喘小鼠肺组织细胞凋亡及炎性反应[9]。然而，miR-20a-5p在类风湿关节炎发生发展中的作用还未知。Starbase靶基因在线软件预测显示，Toll样受体4(TLR4)可能是miR-20a-5p的靶基因[10]。因此，本研究建立TNF-α诱导的成纤维样滑膜细胞MH7A损伤模型，以miR-20a-5p/TLR4为切入点，主要探究了羟基红花黄色素A对TNF-α诱导的MH7A细胞凋亡和炎性因子表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 MH7A 细胞系，上海通派生物科技有限公司；HSYA，纯度>98%，上海源叶生物科技有限公司；DMEM培养液、CCK-8试剂盒、双荧光素酶活性检测试剂盒和二喹啉甲酸(BCA)蛋白检测试剂盒，北京索莱宝；LipofectamineTM 2000试剂盒，美国Invitrogen公司；miR-20a-5p模拟物(mimics)、模拟对照序列(miR-NC)、miR-20a-5p抑制剂(anti-miR-20a-5p)和阴性对照序列(anti-miR-NC)，上海吉玛制药技术；胎牛血清，杭州四季青；兔抗人TLR4和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)单克隆抗体 ......