刘洋君 李丽 陆晓丹

    喉癌的发病率占头颈部癌的第二位，患者的5年生存率较低，复发和转移是喉癌患者死亡的主要原因，因此研究喉癌细胞的迁移与转移机制具有重要意义[1,2]。微小RNA-370(MicroRNA-370，miR-370)是一种肿瘤抑制基因，可参与调控结肠癌、胶质瘤等多种肿瘤细胞的增殖、迁移等[3,4]。Shen等[5]研究表明，miR-370在结肠癌中下调表达，miR-370可靶向MDM4抑制结肠肿瘤的生长。干扰素刺激基因15(interferon stimulating gene 15，ISG15)是一种由Ⅰ型干扰素诱导的蛋白，属于泛素样蛋白超家族，其在多种恶性肿瘤中高度表达[6]。然而笔者发现miR-370与ISG15在喉癌细胞中的作用机制尚不清楚，因此，本研究通过探索过表达miR-370对喉癌细胞(LSC-1)增殖、迁移及侵袭的影响及其对ISG15的调控作用，以期寻找喉癌治疗的新靶点。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 人喉癌细胞LSC-1购于中国科学院细胞库；DMEM培养基(货号：SH40007.01)购自美国Hyclone公司；胎牛血清(货号：F8245-100)、DMSO(货号：D2650)购自Solarbio公司；miR-370过表达质粒(miR-370 mimics)及其阴性对照(miR-NC)、ISG15过表达质粒(ISG15)及其空载质粒(pcDNA)、抑制ISG15表达(si-ISG15)及其阴性对照(si-NC)质粒购自上海斯信生物科技有限公司；miR-370、ISG15、U6、GAPDH引物序列由上海吉玛制药有限公司设计合成；Matrigel胶(货号：356234)购自美国BD公司，CCK-8试剂盒(货号：C0037)、RIPA细胞裂解液(货号：P0013B)购自上海碧云天生物技术有限公司；Lipofectamine 2000(货号：11668-027)、Trizol购自美国Invitrogen公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒(货号：E1920)购自Promega公司；兔抗人ISG15(货号：ab227541)、MMP-2(货号：ab92536)、MMP-9(货号：ab228402)抗体购自英国Abcam公司。M2型全波长酶标仪购自美国MD公司；XDS-1B型显微镜购自上海光学仪器厂；ABI 7500荧光定量PCR仪购自Thermofisher ......