姚黎洁 张茜

    动脉粥样硬化(AS)是一种慢性多因素血管疾病，是引起卒中、心肌梗死、外周动脉疾病和冠状动脉粥样硬化性心脏病等心脑血管疾病的重要原因[1]。氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是AS进展的危险因素，其可增加氧化应激和炎性反应，增强内皮细胞凋亡，导致内皮损伤，促进AS发生发展[2]。因此，减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤可能是防治AS的潜在策略。仙茅苷是从仙茅科仙茅属植物仙茅干燥根茎中提取的酚苷类抗氧化剂，具有抗骨质疏松、神经保护等多种生物活性[3,4]。已经证实仙茅苷通过抑制线粒体通透性转换孔(MPTP)开放来降低线粒体介导的凋亡水平，从而保护心肌缺血再灌注损伤[5]。仙茅苷在体内和体外均能减轻实验性脑缺血损伤[6,7]。然而，仙茅苷对ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤的保护作用并不清楚。环状RNA(circRNA)是由前体mRNA反向剪切形成的闭环结构RNA分子，其通过翻译蛋白、吸附miRNA、与RNA结合蛋白相互作用等途径参与细胞基本过程，circRNA异常表达与AS进展有关[8]。研究显示冠心病患者中circ_0004104显著上调[9]。circ_0004104可能参与ox-LDL介导的血管内皮细胞凋亡、炎症和氧化应激反应[10]。本研究采用ox-LDL诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)构建AS细胞损伤模型[11]，探讨仙茅苷对ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤的保护作用，并以circ_0004104为切入点探讨其可能机制，以期为AS治疗提供潜在策略。

    1 材料与方法

    1.1 材料 HUVEC、Ham’s F-12K培养液、胎牛血清、青链霉素混合液购自武汉普诺赛生物公司；ox-LDL购自杭州华安生物技术有限公司；仙茅苷(纯度98%，货号C3504)购自南京春秋生物工程有限公司；si-NC、si-circ_0004104、pcDNA-circ_0004104购自上海生工生物公司；膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)凋亡检测试剂盒、增强化学发光试剂盒购自南京诺唯赞生物公司；磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)兔多抗(ab9485)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)兔多抗(ab196495)、山羊抗兔IgG二抗(ab205718)、Bcl相关x蛋白(Bax)兔多抗(ab104156)购自美国Abcam公司；Trizol试剂、Lipofectamine 2000、RevertAid第一链cDNA合成试剂盒购自美国Invitrogen公司；TB Green Premix Ex Taq Ⅱ购自大连宝生物公司 ......