李威 王婷 张红蕾

    胃癌是全球癌症相关死亡的第二大原因[1]。目前，胃癌主要采用手术联合放疗、化疗和靶向治疗等现代治疗策略，但仍存在疗效低、毒性大、复发转移率高等缺点。因此，研究胃癌进展的机制，确定有效的药物或治疗靶点具有重要意义。凤尾草总黄酮是从凤尾蕨科、凤尾蕨属植物Pteris multifida Poir中提取的有效活性成分，近年研究表明凤尾草总黄酮对多种癌症具有显著的抗肿瘤活性[2]。如凤尾草总黄酮可抑制宫颈癌细胞增殖和肿瘤形成，抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭[2,3]。然而，凤尾草总黄酮在胃癌中的抗癌功能未见报道。微小RNA(miRNA)是单链、内源性RNA转录本，其通过与靶向mRNA结合，导致mRNA降解和翻译抑制，参与多项细胞活动[4]。目前，多种miRNA已被证实在胃癌中表达失调，参与胃癌发生和进展[5]。miR-1274a在胃癌中表达上调，并直接靶向叉头转录因子4(FOXO4)加速胃癌细胞增殖和迁移[6]。前期预实验显示凤尾草总黄酮能够下调胃癌细胞中miR-1274a表达水平。因此，本研究假设凤尾草总黄酮通过下调miR-1274a在胃癌中发挥抗癌作用，并通过体外实验进行验证，为开发凤尾草总黄酮为新型抗胃癌药物提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 人胃癌细胞AGS、Ham’s F-12培养液、胎牛血清、青链霉素双抗购于武汉普诺赛生命科学公司；Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；miRNA模拟物(mimics)、miRNA抑制物(anti-miRNA)购自广州锐博生物公司；凤尾草由我院中药房提供；Transwell板(24孔)购自美国Corning公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)试剂盒、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(A0208)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)兔源多克隆抗体(AF0234)、MMP-9兔源多克隆抗体(AF5234)、磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)兔源单克隆抗体(AF1186)、TRIzol试剂购自上海碧云天生物研究所；Mir-X miRNA第一链合成试剂盒、SYBR Premix Ex Taq II购自大连Takara生物公司。

    1.2 方法

    1.2.1 凤尾草总黄酮制备[3]:将200 g凤尾草粉碎，按照料液比1∶120加入70%乙醇溶液，60℃条件下提取2次 ......