卢迪 黎瑶 梅希 邱平

    糖尿病(DM)是一种常见的代谢性疾病，常伴有慢性肾脏损害、视网膜病变等并发症。据报道，超过1/3的DM患者将发展为糖尿病肾病(DN)，已成为终末期肾病的主要病因[1]。肾小管损伤是DN的重要特征，研究显示高血糖刺激可诱导活性氧过量产生，导致肾小管上皮细胞凋亡增多；肿瘤坏死因子(TNF)-α等炎性因子可直接破坏肾结构，加剧肾小管损伤[2]。因此，抑制肾小管上皮细胞损伤可能是阻断DN进展的有效策略。环状RNA(circRNA)是一类具有闭环结构的非编码RNA(circRNA)，其通过吸附特定微小RNA(miRNA)发挥竞争性内源RNA作用广泛参与细胞过程。许多研究报道circRNA靶向miRNA参与包括DN等DM并发症的进展[3,4]。研究发现miR-181a-5p在脓毒症、骨关节炎等炎症相关疾病中显著升高，抑制其表达对脂多糖诱导的肾小管上皮细胞损伤、白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤具有保护作用[5,6]。靶基因预测到circATRNL1与miR-181a-5p存在结合位点。已有研究指出circATRNL1能够抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎性反应、细胞凋亡、细胞外基质降解[7]。因此，本研究探讨circATRNL1靶向miR-181a-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡和炎性反应的影响，为阻断DN进展提供潜在有效靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料 HK-2细胞(美国ATCC)；DMEM培养液(美国Gibco公司)；青链霉素双抗、胎牛血清(武汉普诺赛生物公司)；pcDNA、pcDNA-circATRNL1、anti-miR-NC、anti-miR-181a-5p、si-circATRNL1、si-NC、miR-NC、miR-181a-5p mimics(上海吉玛制药公司)；miRNA逆转录试剂盒(美国ABI公司)；PrimeScript逆转录试剂试剂盒(大连Takara生物技术公司)；SYBR Green PCR试剂盒(日本Toyobo公司)；TNF-α酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒、IL-6 ELISA试剂盒、RIPA裂解缓冲液、双荧光素酶报告基因检测试剂盒(上海碧云天生物公司)；膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)(南京凯基生物科技公司)；甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)兔多克隆抗体(A01021)、剪切型半胱氨酸蛋白酶9(Cleaved-caspase 9)兔多克隆抗体(ABP50009)、Cleaved-caspase3(IMG-5700)兔多克隆抗体、羊抗兔IgG二抗(A21020)(武汉艾美捷科技公司) ......