王玉萍 王振 张爱忠

    骨肉瘤是一种原发性恶性骨肿瘤，扩散迅速，最常见于儿童和青少年[1,2]。在发病位置方面，骨肉瘤常见于长骨干骺端，如股骨远端、胫骨近端和肱骨近端[3]。尽管骨肉瘤的早期诊断和联合治疗已有所发展，并且数据显示患者5年生存率显著提高，但复发性和转移性骨肉瘤患者的预后仍较差[4]。截肢虽可挽救患者生命，但也严重影响了患者身心健康[5]。因此，研究骨肉瘤病理机制，寻找新的分子标志物，对骨肉瘤的早期诊断和治疗具有重要意义。环状RNA(circRNAs)是一种新型单链非编码RNA转录本，与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。研究发现，敲除circ_0000069可显著抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭[6]。circ_0000069在宫颈癌中表达上调，与患者淋巴结转移及预后不良密切相关，可促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭[7]。在胰腺癌组织和细胞系中，circ_0000069表达明显上调，下调其可诱导胰腺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞，抑制细胞增殖、迁移、侵袭和异种移植瘤生长[8]。Circinteractome预测显示，circ_0000069与miR-1182 之间存在核苷酸结合位点。研究报道，miR-1182在骨肉瘤组织和细胞中低表达[9]。因此，本实验旨在研究circ_0000212在骨肉瘤中的作用及其是否可通过调控miR-1182表达影响骨肉瘤细胞MG-63的增殖、迁移和侵袭。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取本院2017年1月至2019年1月经病理检测为骨肉瘤的患者30例，获得原发性骨肉瘤组织及相应癌旁组织，每位患者均知情且同意，手术切除后立即将样本保存在-80℃。本研究经本院伦理委员会批准。

    1.2 材料 骨肉瘤细胞株MG-63购自中科院上海细胞库；DMEM培养基、胎牛血清购自美国Hyclone公司；Trziol试剂、反转录、qRT-PCR试剂盒购自日本Takara公司；MTT试剂盒购自美国Sciencell公司；Transwell小室购于美国密理博公司；RIPA蛋白裂解液、二辛可宁酸(BCA)试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司；Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司；

    1.3 细胞转染与分组 取对数生长期MG-63细胞 ......