马真 宋海亮 谢然尖措 赵吉彪

    神经病理性疼痛是中枢神经系统发生损伤或疾病引起的一种慢性疾病，影响30%至50%的世界人口，是患者、社会和医疗领域的重要负担[1,2]。神经病理性疼痛发病机制复杂，有发病率高、现有治疗方案不足、临床干预效率较低等特点，是一件非常棘手的问题，因此需要进一步研究以确定和验证潜在的靶点[2,3]。多项研究表明神经病理性疼痛与炎性反应密切相关，机体炎性因子的大量释放严重损害神经细胞及非神经细胞的生长，影响神经系统功能的恢复，最终引起机体的痛觉异常[4,5]，因此从降低机体炎性反应、缓解疼痛等方面寻找相关的治疗靶点是有效的。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类内源性非编码单链RNA，长度约为22个核苷酸，参与调节神经系统中相关基因的表达，在维持神经系统功能等方面发挥重要作用，可通过调节神经炎症来影响神经病理性疼痛的发生发展过程[6]。miR-338-3p是miRNA家族成员之一，参与炎性反应等多种生物学进程的调控。钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱα，CaMKⅡα)是细胞内传递Ca2+信号的关键分子，具有α、β、γ和δ四种异构体。Zhang等[7]研究发现miR-338-3p通过阻止炎症信号通路的异常激活而抑制促炎性细胞因子的表达，并认为可能是miR-338-3p的直接靶点，但关于miR-338-3p与CaMKⅡγ之间的研究较少，因此本研究通过构建神经病理性疼痛大鼠模型，探究miR-338-3p调控神经病理性疼痛的可能作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物与细胞 55只SD雄性大鼠购于上海吉辉实验动物饲养有限公司，均为SPF级，体重约为240 g，生产许可证号：SCXK(沪)2017-0012。大鼠均在本院动物房内饲养，动物房通风、光照条件良好，温度约25℃，实验期间自由进食进水，每周清洁1次鼠笼并更换新鲜垫料，每天清洁1次饮水瓶。大鼠背根神经元细胞(货号：CP-R126)购于武汉普诺赛生命科技有限公司。

    1.2 主要试剂与仪器 总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)、干扰素γ(interferon γ，IFN-γ)、白介素1β(interleukin 1β，IL-1β)ELISA试剂盒、双荧光素酶报告基因检测试剂盒(货号：R1200、RP1105、SEKR-0009、SEKR-0008、SEKR-0002、D0010)购于北京索莱宝科技有限公司；miR-388-3p类似物(mimic)及其阴性对照物(mimic NC)均油广州锐博生物科技有限公司合成；CaMKⅡγ抗体、GAPDH抗体、羊抗兔IgG(货号：ab262701、ab181602、ab6721)购自美国Abcam；EnVision多功能酶标仪购于PerkinElmer公司；I-U-004爪触觉测试仪、38450电子触觉测量仪购于意大利UGO BASILE公司等 ......