彭子辉 王解 张正森 李晶晶

    类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是最常见的慢性自身免疫性疾病，其特征是滑膜组织炎症、关节软骨破坏和关节畸形，其确切原因尚不完全清楚[1]。滑膜成纤维细胞在软骨破坏中起重要作用，越来越多的证据表明，活化的滑膜成纤维细胞可以表现出与肿瘤样细胞相似的特性，例如过度增殖和迁移以及凋亡不足[2,3]。滑膜成纤维细胞不受控制的生长和迁移被认为是RA形成的原因[4]。因此，有效抑制滑膜成纤维细胞的增殖和迁移并促进细胞凋亡有助于RA症状的改善。环状RNA(circRNA)是一类新近鉴定的非编码RNA分子，其特征是没有自由5’端帽子或3’poly(A)尾部的非规范反向剪接。在过去的十年中，高通量测序与生物信息学分析相结合的发展导致circRNA研究的极速增长[5]。尽管大多数circRNA的生物学功能仍然未知，但逐渐明确的是，circRNA充当竞争性内源RNA(ceRNA)与miRNA结合在人类疾病中具有调控功能[6,7]。以往研究显示，在RA患者的外周血单个核细胞中hsa_circ_0000734的表达明显降低[8]。然而，hsa_circ_0000734在RA中的作用尚不清楚。因此，本研究旨在确定hsa_circ_0000734对RA滑膜成纤维细胞生长和迁移的影响及潜在机制，以期为RA的治疗提供新的方向。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞 RA滑膜成纤维细胞系MH7A(美国ATCC)。

    1.2 主要试剂与仪器 RPMI 1640培养基和胎牛血清(美国Gibco公司，批号：10567014、10099141)；Lipofectamine 3000转染试剂(赛默飞世尔，批号：20200216)；hsa_circ_0000734过表达质粒和pcDNA3.1空载体质粒、miR-16-5p mimics和mimics control(上海吉玛)；Transwell小室(美国Corning，批号：356234)；CCK-8试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(碧云天研究所，批号：C0037、P0012A)；RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒和实时荧光定量PCR试剂盒(北京索莱宝，批号：20191203、20200422)；AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(日本TaKaRa，批号：RR526A)；PCNA、Cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9兔抗单克隆抗体(美国CST公司，批号：34452、12655、40994、13667)；山羊抗兔二抗(美国Abcam ......