卢迪 黎瑶 梅希 邱平

    糖尿病肾病是糖尿病的常见并发症，也是引起终末端肾功能衰竭的主要原因[1]。糖尿病患者长期处于高血糖状态，肾小管上皮细胞经高糖刺激后可产生过度的氧化应激和炎性反应，进一步引起肾小管上皮细胞凋亡或坏死，这也是糖尿病肾病发生的重要原因[2]，因此，抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化应激和凋亡对糖尿病肾病的治疗尤为重要。circ_ZNF609是一种环状RNA(circRNA)，参与多种疾病的发生发展。研究显示，circ_ZNF609在胶质瘤、宫颈癌、前列腺癌和胃癌等肿瘤中表达上调，作为促癌基因促进肿瘤发展进程[3-6]。circ_ZNF609可通过靶向miR-22-3p/ENO1轴促进慢性缩窄性损伤(CCI)大鼠炎性因子表达，加重神经型疼痛进展[7]；circ_ZNF609在视网膜神经变性过程中表达上调，沉默其表达可减少视网膜反应性神经胶质增生和神经胶质细胞活化，其有可能成为视网膜神经变性治疗的分子靶点[8]。但是，circ_ZNF609能否影响肾小管上皮细胞氧化应激和凋亡还未知。circRNA可靶向结合微小RNA(miRNA)分子海绵作用调控miRNA靶基因的表达，进而发挥生物学调控作用[9]。Starbase靶基因在线软件预测显示，circ_ZNF609可能靶向结合miR-423-5p。研究显示，miR-423-5p在糖尿病肾病患者肾组织中表达下调，上调miR-423-5p可靶向抑制Nox4减少高糖诱导的足细胞凋亡，并抑制足细胞氧化应激和炎性损伤，miR-423-5p可作为糖尿病肾病治疗的分子靶标[10]。本研究以肾小管上皮细胞HK2为研究对象，主要观察了circ_ZNF609对高糖诱导的HK2细胞凋亡和氧化应激的影响及其能否靶向miR-423-5p发挥作用，以期为糖尿病肾病的治疗提供分子靶点。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 HK2细胞系，上海通派生物科技有限公司；胎牛血清(FBS)，浙江天杭生物科技有限公司；RNA抽提试剂盒、逆转录试剂盒和PCR试剂盒，大连宝生物；低糖DMEM培养液、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒、二喹啉甲酸蛋白检测试剂盒和双荧光素酶活性检测试剂盒，北京索莱宝；circ_ZNF609小干扰RNA(si-circ_ZNF609)、乱序无意义阴性序列(si-NC)、miR-423-5p抑制剂(inhibor)、miR-423-5p 模拟物(mimc)、模拟对照序列(miR-NC)及PCR引物，上海生工；LipofectamineTM 2000试剂盒，美国Invitrogen公司；超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)检测试剂盒 ......