王丽 卢发菊 李薇 马明福

    糖尿病肾病(DN)是糖尿病最为严重的微血管并发症之一，是终末期肾脏疾病的主要原因。近年来，DN发病率急剧上升，已成为严重的全球公共卫生问题[1]。最近研究表明，在高血糖刺激下足细胞损伤并导致肾小球滤过率下降和持续性蛋白尿，是DN早期发生的关键因素[2]。因此，减轻高糖诱导的足细胞损伤可能对DN防治具有重要价值。类叶升麻苷又叫麦角甾苷，是一种重要的、在多种植物中分布的天然产物，具有抗炎、抗氧化、神经保护、抗肿瘤等生物活性。研究显示，类叶升麻苷对PC12细胞缺糖缺氧损伤具有保护作用[3]。此外，类叶升麻苷可以通过调节TH22淋巴细胞的趋化性和增殖来减轻系膜细胞炎性损伤，改善尿蛋白排泄[4]。然而，笔者发现类叶升麻苷对高糖诱导的足细胞损伤是否具有保护作用鲜有报道。近年来，微小RNA(miRNA)作为天然的存在的非编码调节分子受到越来越多的关注，且多种miRNA通过调节足细胞的丢失和功能障碍在DN进展中发挥作用[5,6]。现有研究显示，miR-496在2型糖尿病患者外周血单核细胞中表达下调，过表达miR-496可减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤[7,8]。本研究通过观察类叶升麻苷对高糖诱导的足细胞损伤以及miR-496表达的影响，探讨其潜在分子机制，以期为类叶升麻苷用于防治DN提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 小鼠肾脏足细胞(MPC5)购自上海通派生物科技公司；γ干扰素购自美国Sigma公司；RPMI-1640培养基、胎牛血清购自美国Invitrogen公司；类叶升麻苷(纯度≥98%)购自上海源叶生物科技有限公司；miR-496模拟物(miR-496 mimics)、模拟物阴性对照(miR-NC)、miR-496抑制物(anti-miR-496)、抑制物阴性对照购(anti-miR-NC)自上海吉凯基因化学技术有限公司；膜联蛋白V异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)凋亡检测试剂盒购于上海凯基生物；兔源肾病蛋白(nephrin)单克隆抗体、兔源足突蛋白(podocin)单克隆抗体、兔源Bcl-2单克隆抗体、兔源Bax单克隆抗体、兔源GAPDH多克隆抗体以及山羊抗兔IgG二抗购于美国Abcam公司；miRNA逆转录试剂盒、SYBR Green Mix购于北京天根生化科技公司 ......