孔令甲 赵维波 刘英超 李培哲

    结直肠癌是临床常见的一种消化系统恶性肿瘤，全球发病率较高，放化疗等治疗手段存在不良反应，多种天然药物具有安全性高、多靶点与不良反应小等特点，因而从中药与天然药物中寻找治疗结直肠癌的药物具有重要意义[1-4]。巴豆生物碱(crotonic alkaloids，CA)是从大戟科巴豆中提取的一种活性成分，研究表明巴豆生物碱可诱导卵巢癌细胞周期阻滞而抑制细胞增殖并可促进细胞凋亡[5]。但对于巴豆生物碱与结直肠癌相关研究报道笔者未见报道。微小RNA(microRNA，miRNA)可能通过靶向结合mRNA的3’UTR而抑制靶基因翻译或抑制其表达从而调节细胞生长及转移等生物学行为，研究表明miR-4317在乳腺癌组织和细胞中表达降低，过表达miR-4317可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭[6]。而miR-4317在结直肠癌中的作用尚未可知。因此，本研究探讨巴豆生物碱对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响、miR-4317在结直肠癌的作用以及巴豆生物碱对miR-4317的调控作用，为结直肠癌治疗药物的研发提供新方向。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 巴豆生物碱购自武汉谷歌生物(纯度≥99%)；人结直肠癌细胞SW620购自武汉普诺赛生命；MTT、RNA提取试剂、凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物；Lipofectamine2000购自美国Invitrogen；反转录与荧光定量PCR试剂购自北京天根生化；miR-4317寡核苷酸模拟物(miR-4317 mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、miR-4317特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-4317)及其阴性对照(anti-miR-NC)购自广州锐博生物；兔抗人cleaved-caspase3、cleaved-caspase9抗体与HRP标记的山羊抗兔IgG二抗购自美国Abcam ......