王雪梅

    肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是原发性肝癌的主要类型(>85%)，其病死率位居世界第二，近几年肝细胞癌的新发病例数和死亡数逐年增长，尤其在中国[1]。对于肝细胞癌早期的患者进行肝脏切除、肝移植或局部消融有助于患者的预后，而晚期或肝硬化患者的预后很差[2]。微小RNA(miRNA)是一种短链非编码的内源保守的18～22个核苷酸之间的RNA片段，通过调控靶基因的转录、翻译而抑制蛋白的表达，以此参与人类几乎所有疾病的发展[3]。miR-452-5p为众多新发现的miRNA之一[4]。m6A作为真核细胞mRNA上最常见的内部修饰之一，对基因的表达十分重要[5]。YTH结构域家族2(YTH domain family ,member 2，YTHDF2)是最有效的m6A结合蛋白，可通过结合含有m6A的结合位点的基因以削弱其稳定性[6]。最新报道显示，YTHDF2能够降解肿瘤启动子并抑制癌基因的mRNA表达[7]。铁死亡是近年提出的一种调节性细胞死亡方式，主要依赖于细胞内铁和脂质活性氧(reactive oxygen species，ROS)积累所引起的细胞死亡[8]。本研究旨在探索miR-452-5p、YTHDF2调节肝细胞癌细胞凋亡、铁死亡的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 L02、SMMC-7721、HepG2、Huh7、Hep3B细胞购自美国菌种保藏中心；活性氧检测试剂盒(DCFH-DA荧光探针法)购自北京百奥莱博公司；细胞计数试剂盒(cell counting Kit，CCK8)购自日本同仁；实时荧光定量聚合酶链式反应(real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)试剂盒、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙锭(PI)细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天；细胞免疫荧光法检测细胞中ROS含量；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega；所有miR-con、miR-452-5p mimics、anti-miR-con、anti-miR-452-5p及引物的设计合成均委托上海吉玛公司完成。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：L02、SMMC-7721、HepG2、Huh7、Hep3B细胞使用含有10%胎牛血清的DMEM培养液在37℃恒温细胞培养箱中培养 ......