陈相言 刘徽 杨欢

    白血病是造血系统常见恶性肿瘤，感染、免疫功能异常、遗传、病毒、辐射等均可能与白血病的发生有关[1]。白血病的发生机制较为复杂，骨髓造血干细胞移植、联合化疗等是治疗的有效途径，但目前白血病患者5年的生存率仍然≤50%[2]。中药具有来源广泛、容易获取等优点，现阶段已经被广泛应用于肿瘤治疗。马钱苷是从山茱萸中提取的环烯醚萜苷类，也是山茱萸含量最高的活性成分，具有多种药理学作用，对阿尔茨海默病、糖尿病、肿瘤等均有改善功效，马钱苷脱去一分子的葡萄糖后产生马钱苷元，马钱苷元具有消炎等功效[3-5]。近年有报道显示，马钱苷元能够在体外抑制胰腺癌的进展，降低胰腺癌细胞增殖能力[6]。中药抗肿瘤机制较为复杂，其可以通过作用于细胞内信号转导通路发挥作用[7]。Hedgehog信号在人体内的作用极为广泛，参与细胞生长、胚胎发育等过程，对疾病进展也有调控功能[8]。在肿瘤中已经证明Hedgehog过度激活，而抑制Hedgehog信号能够降低肿瘤恶性生长能力[9]。转化生长因子-β1(TGF-β1)有调控细胞生长、凋亡等作用的能够诱导白血病细胞凋亡和增殖抑制[10]。本实验探讨马钱苷元对白血病细胞增殖、周期、凋亡和TGF-β1表达影响及相关机制，为临床应用提供理论资料。

    1 材料与方法

    1.1 材料 细胞周期依赖性激酶抑制因子(p21)抗体购自美国 Santa Cruz Biotechnology；B淋巴细胞瘤-2关联X的蛋白(Bax)抗体购自美国Cell Signaling Technology；TGF-β1抗体购自南京欧凯生物科技有限公司；Gli2抗体购自美国Proteintech；B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)抗体购自上海晅科生物科技有限公司；Smo抗体购自美国Abcam；马钱苷元购自成都植标化纯生物技术有限公司；白血病HL-60细胞购自上海美轩生物科技有限公司；Hedgehog信号通路激活剂(Purmorphamine，PM)购自美国Selleck。

    1.2 细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测马钱苷元对白血病HL-60细胞增殖影响 白血病HL-60细胞接种到96孔板内，细胞接种密度为2×103个/孔，每个孔内添加150 μl的细胞培养液，根据实验需要分别将细胞分成对照组和马钱苷元组，其中对照组中添加0 μmol/L的马钱苷元，马钱苷元组分成30、60、120、240 μmol/L浓度梯度，将细胞培养板放在37℃ ......