郝春媛 李同华 任洋 张誉洋

    心力衰竭，是不同类型心血管疾病的终末阶段，其发病率和死亡率高，且有逐年增加的趋势，对人类健康威胁极大[1]。研究表明线粒体结构和功能的异常与心力衰竭的发展有关，而线粒体融合与分裂的动态平衡是线粒体发挥正常功能的基础[2]。心力衰竭的主要病理过程是心肌重构，而线粒体分裂时氧化能力及三磷酸腺苷(ATP)的降低是导致心肌重构发生的主要原因[3]。文献显示微小RNA(miRNA)不仅能够参与调控心肌细胞的生物学行为，还能影响心血管疾病的进程[4]。miR-27b-3p是miR-27家族的一员，其在癌细胞中研究较多，只有袁淑菁等[5]发现miR-27b-3p过表达可促进心肌成纤维细胞纤维化。生物信息学预测发现视神经萎缩蛋白1(optic atrophy protein-1，OPA1)与miR-27b-3p可能存在靶向关系。OPA1是线粒体融合蛋白的一种，研究表明OPA1在心力衰竭模型心肌细胞中下调表达[6]。因此，本研究通过建立心力衰竭模型，观察miR-27b-3p的表达情况，并探讨其对心肌细胞线粒体融合的影响及可能的作用机制，以期为心力衰竭的临床治疗提供新的靶点和参考依据。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 miR-27b-3p antagomir及阴性对照antagomir NC、miR-27b-3p inhibitor及阴性对照inhibitor NC、miR-27b-3p mimics及阴性对照mimics NC、OPA1 siRNA及其对照siRNA NC由上海生工生物公司提供；戊巴比妥钠购自海江莱生物科技有限公司；台氏液、无钙台氏液购自上海抚生实业有限公司；DMEM培养基、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)试剂盒购自北京索莱宝生物公司；Lipofectamine 2000转染试剂购自上海笃玛生物科技有限公司；双荧光素酶检测试剂盒购自上海翌圣生物公司；ATP、ROS、JC-1试剂盒购自上海懋康生物科技有限公司；OPA1、线粒体融合蛋白(mitofusion，MFN)1、MFN2、电压依赖性阴离子通道1(voltage-dependent anion channel 1，VDAC-1)、细胞色素C氧化酶Ⅳ亚型(Cytochrome C oxidase Ⅳ subtype，COXⅣ)、线粒体转录因子A(Mitochondrial transcription factor A，Tfam)、过氧化物酶体增殖物激活受体Y辅激活因子1(peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1α ......