余秋男 刘京让 宋海龙

    创伤性脑损伤(TBI)是全球死亡率和发病率的主要原因,该疾病造成的全球经济损失约为4 000亿美元,占世界生产总值的0.5%[1]。目前对于原发性头部创伤的有效治疗方案较多,但治疗继发性损伤的治疗方案主要是降低炎性反应、阻止急性期神经元死亡、减少氧化应激损伤以及抗神经兴奋性毒性[2]。长链非编码RNA(LncRNA)最初被认为是转录的副产品,但越来越多的证据表明lncRNA在调节许多生物学过程中发挥着关键作用。核富集转录本1(Neat1)作为LncRNA家族中的一员,在TBI发生后具有显著变化[3]。微小RNA(miRNA)可参与许多疾病的病理生理过程,且脑特异性miRNA的检测可作为TBI的替代标志物。研究表明miR-128-3p有望作为TBI血液中的生物标志物[4]。生物信息学预测到Neat1与miR-128-3p存在结合位点。本实验通过自由落体法建立TBI小鼠模型,探讨LncRNANeat1靶向调节miR-128-3p表达对TBI小鼠认知功能和神经炎症的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物:清华大学提供雄性、BALB/c小鼠80只,要求:8周龄,体重25～28 g,许可证号:SCXK(京)2019-0016。小鼠饲养温度、湿度分别为:22℃～25℃、55%～65%,定时通风、消毒。本研究经动物伦理委员会批准。

    1.1.2 试剂与仪器:武汉普诺赛生命科技有限公司提供293T细胞(产品编号:CL-0005);由上海生工生物有限公司构建野生型和突变型Neat1荧光素酶报告基因载体(Neat1 WT、Neat1 MUT);由上海生工生物工程有限公司合成腺病毒空载体组(Ad-NC)、Neat1过表达腺病毒(Ad-Neat1)、miR-128-3p模拟物阴性对照(immics NC)、miR-128-3p抑制物阴性对照(inhibitor NC)、miR-128-3p模拟物(miR-128-3p mimic)、miR-128-3p抑制物(miR-128-3p inhibitor)以及Neat1、miR-128-3p、U6、β-actin引物;上海恪敏生物科技有限公司提供白细胞介素-6(IL-6,货号:BH8273)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)ELISA试剂盒(货号:E-EL-M0049);abcam公司提供半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1,caspase-1,货号:ab179515)、核因子-κB p65(NF-κB p65,货号:ab207297)、磷酸化核因子-κB p65(Phospho-Nuclear factor-κB p65,p-NF-κB p65;货号:ab76302)一抗 ......