丁平 罗政

    骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种全身性骨骼疾病,表现为骨量低、骨组织退化、骨结构受损[1]。该病会增加骨折和其他骨相关疾病的发生风险,导致全球死亡率和医疗保健成本增加[2]。据报道,骨组织中成骨细胞成骨能力降低是OP形成原因之一[3]。而骨形成涉及成骨细胞增殖、迁移及分化等过程。因此,探究成骨细胞增殖、迁移及分化相关的分子机制对于OP的治疗具有重要的意义。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一种长度>200个核苷酸的非编码RNA,研究表明,lncRNAs在多种疾病中异常表达[4]。X染色体失活特异转录本(X chromosome inactivation specific transcript,XIST)是一种lncRNA,已有研究报道,过表达XIST能促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化[5]。而XIST对人成骨细胞增殖、迁移及分化的影响笔者所见鲜有报道。lncRNA通过海绵化miRNA来调控mRNA表达是近年来阐述lncRNA作用机制的常用方法[6]。本研究通过生物信息学分析发现,XIST与miR-545-3p存在调控关系,miR-545-3p与SMAD5可靶向结合。而笔者发现XIST能否通过调控miR-545-3p/SMAD5轴影响人成骨细胞增殖、迁移及分化尚不明确。因此,本研究主要探究XIST对人成骨细胞增殖、迁移及分化的影响以及其作用的分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 人成骨细胞(human osteoblast,hOB)购自武汉原生原代生物公司。

    1.2 主要试剂 CCK-8试剂盒(货号:CK04)购自上海经科化学公司;细胞核蛋白提取试剂盒(货号:KTP3002)购自亚科因(武汉)生物公司;兔源一抗SMAD5(货号:ab40771)、p-SMAD5(货号:ab92698)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)(货号:ab229126)、Runt相关转录因子2(runt related transcription factor 2,Runx2)(货号:ab236639)、骨钙素(osteocalcin,OCN)(货号:ab133612)、GAPDH(货号:ab8245)、Histone H3(简称H3,货号:ab1791)及辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗(货号:ab6721)均购自美国Abcam公司 ......