李曼 余昌勇 秦鲜 王萍 万新月

    结直肠癌(CRC)是在世界范围内普遍存在的恶性肿瘤之一,虽然临床诊断和综合治疗策略的进步延长了CRC患者的生存期,但伴有远端转移CRC患者的预后仍然较差。环状RNA(circRNA)是具有共价闭合的连续环状结构的非编码RNA分子,其具有内源性miRNA海绵功能,并通过抑制miRNA活性、调节其靶基因表达参与调控癌细胞恶性表型,circRNA异常表达参与几乎所有类型癌症进展过程[1]。研究报道非小细胞肺癌组织中circ_0072083水平升高,敲低circ_0072083可提高顺铂对肿瘤细胞的促凋亡、增殖抑制和抗转移作用[2]。然而,circ_0072083在CRC中的生物学功能未见报道。早期研究显示CRC患者血浆、CRC组织中miR-142-3p表达下调[3],上调miR-142-3p通过诱导细胞周期阻滞能够抑制CRC细胞增殖和肿瘤形成[4]。靶基因预测显示miR-142-3p是circ_0072083的潜在靶点,然而circ_0072083能否靶向miR-142-3p调控CRC进展仍需探讨。本研究通过分析CRC组织中circ_0072083、miR-142-3p表达情况,探讨circ_0072083靶向在CRC细胞增殖、转移中的作用,旨在为临床治疗CRC提供有效靶点。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2018年3月至2019年12月在武汉市江厦区第一人民医院行手术切除52例CRC患者的CRC组织和配对的癌旁组织。其中男30例,女22例;年龄62～76岁。手术切除前均未接受放疗或化疗。样本离体后立即置于液氮冷冻,然后在-80℃下保存。本实验方案获得医院医学伦理委员会批准。所有参与者获得书面知情同意。

    1.2 细胞与试剂 CRC细胞LoVo购自中国典型培养物保藏中心;Lipofectamine 2000试剂购自美国Invitrogen公司;si-circ_0072083、si-NC、miR-142-3p mimic、miR-NC、anti-miR-NC、miR-142-3p Inhibitor、circ_0072083野生型报告质粒(WT-circ_0072083)、circ_0072083突变型报告质粒(MUT-circ_0072083)购自广州锐博生物公司;CCK-8检测试剂盒、TaqMan multiplex qPCR master mix购自上海翌圣生物;高容量cDNA逆转录试剂盒购自美国ABI公司;Transwell室购自美国Millipore公司;兔源E-cadherin抗体(FNab02617)、兔源N-cadherin抗体(FNab05569)购自武汉菲恩生物公司;羊抗兔IgG(ab205718)和兔源GAPDH抗体(ab70699)购自美国abcam公司 ......