王惟达 蒋林 史桂霞

    椎间盘退行性病变是腰椎自然老化、退化的病理过程,严重影响人们日常生活和工作[1]。髓核组织内IL-1β含量增多,研究证实IL-1β能促进髓核细胞凋亡、自噬,导致腰椎间盘发生退化[2]。miR-149家族主要miR-149-3p和miR-149-5p,与疾病发生密切相关[3],如IL-1β处理软骨细胞后miR-149低表达,上调miR-149的表达抑制IL-1β诱导软骨细胞增殖和细胞外基质的降解,促进细胞的凋亡[4]。miRNA是近年研究的热点,介导参与髓核细胞增殖、凋亡、炎性反应等过程,与椎间盘退行性病变发展密切相关[5]。JNK/p38 MAPK信号通路信号通路能参与髓核细胞增殖、凋亡、炎性反应等过程,进而影响椎间盘退行性病变发展[6]。鉴于此,研究采用IL-1β处理髓核细胞,探讨miR-149-3p可能通过JNK/p38 MAPK信号通路对IL-1β诱导髓核细胞增殖、凋亡、自噬和炎性反应的影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂 胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、胎牛血清、DMEM培养基购于美国Gibco公司;IL-1β购于美国Sigma公司;miR-NC、miR-149-3p、引物购于上海吉玛公司;p38 MAPK通路激活剂Anisomycin购于美国MedChemExpress公司;Lipofectamine 2000转染试剂盒购于美国Invitrogen公司;Trizol试剂盒、逆转录试剂盒、SYBR Green试剂盒购于北京百奥莱博科技有限公司;MTT试剂盒购于碧云天公司;凋亡试剂盒购于凯基生物公司;Bax抗体、Bcl-2抗体、Beclin 1抗体、LC3II抗体、LC3I抗体购于美国CST公司、JNK抗体、p38 MAPK抗体、p-JNK抗体、p-p38 MAPK抗体购于美国Abcam公司;TNF-α试剂盒、IL-6试剂盒、IL-8试剂盒购于南京建成生物研究所。

    1.2 髓核分离与培养 SPF级SD大鼠购于上海斯莱克实验动物有限公司,许可证:SCXK(沪)2017-0006 ......