焦燕 李三峰 李红燕

    偏头痛是一种常发的神经血管紊乱性疾病,患者出现搏动性头痛、单侧或双侧中重度头痛,并可反复发作,对身心健康、生活质量及工作能力造成很大危害[1,2]。目前普遍认为三叉神经血管系统的激活与偏头痛的发生发展密切有关,其中神经炎症是关键病理环节[3]。瞬时受体电位锚蛋白1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)参与了神经病理性伤害过程,被激活时可导致眶周机械性痛觉超敏[4],且TRPA1在偏头痛发病过程中起到关键调控作用,以抗TRPA1抗体预处理偏头痛大鼠,可抑制三叉神经血管系统激活致敏,减轻神经炎症,改善头痛症状[5],因此TRPA1可成为偏头痛的潜在治疗靶点。磷酯酶C(phospholipase C,PLC)/蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号可介导促炎介质诱导慢性疼痛,PLC和PKC的抑制剂可减轻促炎因子前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)引发的背根神经节炎症损伤,进而改善持续的外周疼痛过敏症状[6],抑制PKC信号可降低硝酸甘油诱导的小鼠炎性因子过表达,减轻头痛[7]。另有研究显示TRPA1可激活PKC信号,并促进瑞芬太尼诱导的术后痛觉过敏发生[8],因而推测TRPA1可能通过PLC/PKC信号通路影响偏头痛大鼠的行为学和疼痛敏感性。本研究以腺病毒包装的TRPA1 siRNA载体敲低偏头痛大鼠TRPA1基因,对以上假设进行验证。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 SD大鼠购自武汉大学动物实验中心,许可证号SCXK(鄂)2019-0004,SPF级,6周龄,雄性,体重(190±15)g。大鼠饲养在医院动物房内饲养笼中,每笼4～5只,动物房内保持屏障环境,严格遵照《中华人民共和国实验动物管理条例》进行饲养。

    1.2 试剂与仪器 (1)硝酸甘油(货号100236)自上海联迈生物工程有限公司购买;PMA(货号YT346)自北京百奥莱博科技有限公司购买;以腺病毒包装的TRPA1 siRNA载体、空慢病毒载体、TRPA1及GAPDH引物、Trizol(货号B511311)、PGE2酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒(货号D751014)、大鼠白介素(interleukin,IL)-6 ELISA试剂盒(货号D731010)、一步法反转录荧光定量试剂盒(货号B639277)、大鼠IL-10 ELISA试剂盒(货号D731011)自生工生物工程(上海)股份有限公司购买;兔源抗大鼠PLC抗体(货号ab107455)、兔源抗大鼠p-PLC抗体(货号ab4828)、兔源抗大鼠PKC抗体(货号ab181558)、兔源抗大鼠p-PKC抗体(货号ab109539)自美国Abcam公司购买;强RIPA裂解液(货号P0013B)、BCA蛋白测定试剂盒(货号P0011)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG二抗(货号A0208)自上海碧云天生物技术有限公司购买等 ......