付堂清 李文忠 罗仕云 师路 杜镇鸿

    肺癌是导致癌症相关死亡的主要原因之一,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占所有肺癌病例的80%以上[1]。约60%的肺癌患者在确诊时已处于晚期,无法通过根治性手术治疗。由于NSCLC细胞对于化疗、放疗和靶向治疗的耐药性,晚期NSCLC的治疗仍然极具挑战[2,3]。长链非编码核糖核酸(long non-coding ribonucleic acid,LncRNA)肺癌相关转录物1(lung cancer-associated transcript 1,LUCAT1)可以促进部分癌症的进展。LUCAT1在NSCLC组织和细胞系中的表达水平显著升高,促进NSCLC细胞对顺铂的耐药性,敲低LUCAT1可显著抑制了裸鼠异种移植肿瘤的生长[4,5]。这些研究证实LUCAT1是NSCLC的一个有潜力的治疗靶点,而LUCAT1对NSCLC进程的促进作用的详细机制值得进一步研究。微小RNA(microRNA,miRNA)在癌症生物学中也占有重要地位,其中微小RNA-937-5p(microRNA-937-5p,miR-937-5p)是近期新发现的一类miRNA。据报道,miR-937-5p在结直肠癌中表达升高,可通过下调其靶基因促进肿瘤细胞增殖、迁移和血管生成[6]。据报道,基质金属蛋白酶家族成员基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)在包含NSCLC在内的肿瘤发展中具有重要作用[7]。因此,本研究将探究LUCAT1在NSCLC中的生物学功能及其调控机制,以期为NSCLC的靶向治疗提供实验依据,报道如下。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 本研究经医院伦理委员会批准,并且获得每位患者的书面知情同意书,均按照赫尔辛基宣言的原则进行。招募2018年4月至2020年4月本院术前未接受放疗、化疗或靶向治疗的65例NSCLC患者,其中男38例,女27例;平均年龄(52.45±6.36)岁,其中肺腺癌40例,患者诊断为患者肺鳞状细胞癌25例。术中采集NSCLC组织及其相应癌旁组织,所有组织标本切除后立即在液氮中冷冻并保存在-80℃冰箱中待测。

    1.2 主要材料 NSCLC细胞系H1299(YS743C)、H1975(YS213C)、A549(YS1995C)和H2228(YS3251C)与人正常肺上皮细胞系BEAS-2B(AC-2620H)均获自美国典型培养物保藏中心(ATCC);胎牛血清(C0227)、青霉素-链霉素(ST488)、BrdU(≥99%,ST1056)、DAPI(C1002)、RIPA裂解液(P0013B)、ECL试剂盒(P0018FS)均获自上海Beyotime;PRMI-1640培养基(A1049101)获自美国Thermo Fisher Scientific;靶向LUCAT1的shRNA(sh-LUCAT1)和相应阴性对照(sh-NC)、miR-937-5p抑制物(anti-miR-937-5p)、miR-937-5p模拟物(miR-937-5p mimics)和相应阴性对照(miR-NC mimics)均购自上海Genepharma;Lipofectamine 2000(11668500)、pcDNA3.1表达载体(V79020)、TRIzol试剂(10296010)、SuperScript IV逆转录酶(18090010)购自美国Invitrogen;QuantiTect SYBR Green PCR试剂盒(DXT-204143)获自美国Aiagen;一抗MMP13(ab51072,60 kDa)、GAPDH(ab9485,37 kDa)、二抗山羊抗兔IgG H&L(HRP,ab205718)均获自英国Abcam;Cell Counting Kit-8(CCK-8,CK04)获自日本Dojindo;Dual-Luciferase Reporter Assay System(E1910)获自美国Promega ......