高伟 李慧颖 李丹

    缺血性心脏病是常见的心血管疾病,它可导致心肌缺血缺氧,最终导致心肌细胞死亡[1]。心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤是缺血性心脏病的常见临床和病理状态,尤其是急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)后。心肌I/R损伤是AMI治疗失败和病情恶化的主要原因之一[2]。普拉克索是一种选择性多巴胺D2受体激动剂,具有多巴胺能活性、抗氧化活性和神经保护作用[3]。先前的研究表明,普拉克索对心肌I/R损伤具有保护作用,其通过促进心肌细胞自噬和活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生,改善缺氧/复氧心肌细胞存活率,降低乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性[4],然而,作用机制尚未完全明确。硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)是一种促氧化蛋白,对硫氧还蛋白的活性及其抗氧化功能具有负性调节作用[5]。已有研究表明,心脏特异性TXNIP过表达通过诱导ROS产生和心肌细胞凋亡,促进心肌I/R损伤小鼠心功能不全,而心脏特异性TXNIP基因敲除则会减轻I/R诱导的心肌细胞损伤,改善心功能[6]。另有研究表明,敲低TXNIP通过抑制p38和C-Jun氨基末端激酶(C-Jun N-terminal kinse,JNK)磷酸化减轻氧糖剥夺所致的神经元细胞氧化应激损伤,从而在缺血性卒中中发挥保护作用[7]。本研究旨在探究普拉克索对氧糖剥夺/再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)心肌细胞的作用及机制是否与TXNIP和p38/JNK通路相关,以期为明确普拉克索在心肌I/R损伤中的药理作用机制及开发新的心肌I/R损伤治疗药物提供新的科学资料。

    1 材料与方法

    1.1 材料 大鼠心肌细胞H9c2购自中国科学院细胞库;普拉克索购自美国MedChemExpress;Lipofectamine 2000转染试剂购自美国ThermoFisher Scientific;TXNIP 过表达载体(oe-TXNIP)及其阴性对照(oe-NC)购自苏州泓迅生物科技股份有限公司;CCK-8试剂盒购自生工生物工程(上海)股份有限公司;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(比色法)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)测定试剂盒(免疫抑制法)、丙二醛(MDA)测定试剂盒(TBA法)和总超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(WST-1 法)购自南京建成生物工程研究所;Reactive Oxygen Species Assay Kit 活性氧(ROS)检测试剂盒和Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司;TXNIP和GAPDH抗体购自英国Abcam公司;p-p38、p38、p-JNK和JNK抗体购自美国Cell Signaling Technology;AceQ qPCR SYBR Green Master Mix购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司 ......