贾祎佳 陆廷盛 姚书眈 杨建文 姬林松 杨再松 罗春山

    脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是最严重的损伤之一。全世界每年25～50万人受SCI的影响[1]。SCI可引发一系列的并发症如呼吸问题、自主神经反射异常、痉挛等,严重妨碍患者健康及生活质量,亟需新方法解决该问题[2]。骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)具有较强的更新能力及干细胞特性,可用于治疗各种疾病[3]。研究发现不同细胞来源的外泌体包含miRNA、蛋白质、脂质等活性物质,具有免疫调节、抑制瘢痕形成、促神经再生等作用,为SCI治疗提供广阔的治疗前景[4]。miRNA是一类小的非编码RNA,通过直接结合基因的3’非翻译区调节其下游靶基因,在疾病中发挥重要作用,已证实其在脊髓损伤中的表达及功能[5]。但miR-133a作为家族成员之一,研究发现外泌体来源miR-133a可以对受体细胞产生生物学影响,参与去神经支配等病理学变化[6]。但BMSCs外泌体来源miR-133a是否可以介导SCI的发展尚不清楚。本研究探讨BMSCs外泌体来源miR-133a对SCI大鼠修复的影响研究。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物及细胞来源:①兰州大学实验动物中心提供55只SD清洁级雄性大鼠,体重210～240 g,7周龄,许可证号:SCXK(甘)2018-0002。所有大鼠均喂养在标准鼠笼中,房间温度(23±2)℃、湿度(50±10)%,12 h光照-12 h黑暗循环,大鼠均自由摄食和饮水。所有程序经机构动物伦理委员会批准。②无锡欣润生物科技有限公司提供大鼠小胶质细胞(BV-2),细胞置于DMEM/F12培养基中,并加入100 U/ml链霉素及青霉素、10%胎牛血清,于CO2培养箱中培养。

    1.1.2 实验试剂及仪器:①广州锐博生物科技有限公司提供miR-133a抑制剂及抑制剂对照(NC);Roche公司提供TUNEL凋亡试剂盒;赛默飞公司提供双荧光素酶报告基因试剂盒;Umibio公司提供外泌体提取试剂盒;CST公司提供CD90、CD45抗体;Abcam公司提供Alix、CD63及胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)、炎性小体3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-1一抗 ......