殷德振 陈聪 王鹏 王元浩 李宏达

    脊髓损伤是一种具有高致残率与致死率的疾病类型之一,并可促使肢体瘫痪或劳动力丧失,已严重降低患者生活质量,目前脊髓损伤尚无有效的治疗方法[1]。脊髓神经元细胞凋亡及其突出结构及功能丧失是脊髓损伤的病理学基础,缺氧或相关应激条件下,脊髓神经元细胞可产生大量氧自由基从而促使细胞发生氧化应激反应,进而促进细胞凋亡[2]。长链非编码RNA(LncRNA)差异性表达与脊髓损伤密切相关,并可能作为脊髓损伤诊断及治疗的潜在靶点[3,4]。LncRNA CYTOR低表达于损伤的软骨细胞中,上调其表达可抑制软骨细胞凋亡并促进细胞增殖[5]。但LncRNA CYTOR与脊髓损伤相关性研究尚未见报道。Starbase预测显示LncRNA CYTOR与miR-136-5p存在互补序列。研究表明,miR-136-5p在脊髓损伤中表达上调,并可促进炎性因子表达[6]。但笔者发现,LncRNA CYTOR/miR-136-5p分子轴在脊髓损伤的发生发展过程中具体作用机制尚不明确。因此,本研究通过构建大鼠背脊髓神经元细胞细胞损伤模型,探讨LncRNA CYTOR对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠背脊髓神经元细胞损伤过程的影响及与miR-136-5p的关系。报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 大鼠背脊髓神经元细胞(上海瑄科生物科技有限公司);H2O2(美国Sigma);Trizol试剂(美国Thermo Fisher);miRNA提取试剂盒、反转录试剂盒及PCR试剂盒(北京天根生化科技有限公司);Lipofectamine2000转染试剂(美国Invitrogen);pcDNA、pcDNA-LncRNA CYTOR、miR-NC、miR-136-5p mimics(上海吉玛制药技术有限公司);MTT试剂盒、细胞凋亡检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司);IL-6、IL-21 ELISA检测试剂盒(武汉华美生物工程有限公司);双荧光素酶报告基因检测试剂盒(美国Promega);兔抗鼠Bax、Bcl-2、GAPDH单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG多克隆抗体(美国Santa Cruz) ......