孙伟 何萌萌 邵春芝 宋云超

    在临床治疗过程中,大量难治性低氧血症危重患者需要高氧治疗,但是,长期暴露于高水平的氧气会导致急性肺损伤,并可能导致新生儿支气管肺发育不全和成人急性呼吸窘迫综合征[1]。在高氧诱导的急性肺损伤中,高氧可导致肺泡上皮细胞凋亡和坏死[2]。微小RNA(MicroRNA,miRNA)是一种由18～22个核苷酸组成的小型非编码RNA,在全身组织和器官中广泛表达。miRNA参与细胞生长、增殖、分化、凋亡、代谢和其他生物过程。根据报道,miR-146a在过氧化氢刺激的Ⅱ型肺泡上皮细胞中低表达,同时检测到细胞凋亡的增加[3]。miR-146a可以减轻烟雾刺激的小鼠炎性反应,调节吸入性肺损伤进程[4]。这些结果提示,miR-146a对肺损伤具有一定的保护作用,但其机制尚未完全明了。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路是高氧肺损伤中的关键传导途径[5],此外,JNK也是miR-146a的下游靶点之一[6]。基于此,本研究探讨miR-146a、JNK信号通路与高氧诱导的肺泡上皮细胞氧化应激和凋亡的关系。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 肺泡上皮细胞A549购自美国典型培养物保藏中心,Roswell Park Memorial Institute(RPMI)-1640培养基购自美国Gibco,miR-146a mimic购自广州RiboBio公司,超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、锰(Mn)SOD检测试剂盒和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)试剂盒购自南京建成公司,膜联蛋白(Annexin V)V-FITC/碘化丙啶(propidium iodide,PI)细胞凋亡试剂盒购自江苏凯基公司,miRcute miRNA cDNA第一链合成试剂盒、miRNA RT-PCR试剂盒购自北京天根公司。

    1.2 细胞培养与实验分组 肺泡上皮细胞A549在RPMI-1640培养基(10%胎牛血清)中培养,生长环境为37℃、5% CO2。当肺泡上皮细胞处于对数生长期时,将其分为Con(对照)组、Model(模型)组、Model+miR-NC组、Model+miR-146a组、Model+miR-146a+Anisomycin组。其中,Model组高氧处理时,培养箱中通入高纯混合气体(3 L/min),包含O2(900 ml/L)和CO2(50 ml/L)[7],保持10 min,之后密闭培养 ......