张思思 蔡英敏 王武涛 乔艳

    卤代吸入麻醉剂是目前被广泛应用于全身麻醉的一种药物,但其对肝脏有不同程度的损伤[1]。安氟烷是卤代吸入麻醉剂中的一种,产生作用缓慢,常与其他药物一起诱导麻醉,尽管其肝毒性较低于氟烷,但依然能够在术后引起急性肝损伤[2]。因此,深入研究术后麻醉剂诱导的肝损伤机制及其预防途径是必要的。绿原酸(Chlorogenic acid,CGA)是一种多酚,多存在与咖啡、山楂、山药、金银花等物质中,具有抗炎、抗菌、抗癌以及神经保护等多种作用[3]。研究已经证实,CGA能够减轻他莫昔芬介导的肝肾损伤,同时也可以通过抑制内质网应激减轻肾损伤[4,5]。内质网(ER)应激是由ER内积累的未折叠或错误折叠蛋白激活的未折叠蛋白反应(UPR)。蛋白激酶RNA样ER激酶(PERK)是介导UPR的信号通路的上游因子之一,其磷酸化能够诱导下游真核翻译起始因子2α(eIF2α)磷酸化,激活促凋亡转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达,促进细胞凋亡[6]。目前已经发现,通过抑制ER应激可以降低肝细胞中的炎性体活化改善肝损伤,也可以降低细胞凋亡率减轻药物诱导的肝损伤[7]。因此,基于上述了解,本研究利用安氟烷诱导大鼠产生肝损伤,探讨CGA保护大鼠肝毒性的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 SPF级SD雄性大鼠60只,8周龄体重160～200 g,购于卡文斯百格(苏州)模式动物研究有限公司,许可证号：SCXK(苏)2018-0002。大鼠均在温度24～26℃,湿度60%的环境中适应性饲养3 d。

    1.2 药品及试剂 安氟烷(上海雅培制药有限公司);PERK激活剂CCT020312(CCT,货号：HY-119240,MedChemExpress);天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(货号：EK-R38215、EK-R37339、EK-R37579,上海酶研生物科技有限公司);苏木素-伊红(HE)染色试剂盒(货号：G1120,北京索莱宝科技有限公司);TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(货号：40307ES20,翌圣生物科技股份有限公司);BCA检测试剂盒(货号：JLC-G7687,江西江蓝纯生物试剂有限公司);肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)ELISA试剂盒(货号：SEKR-0009、SEKR-0002、SEKR-0005,北京索莱宝科技有限公司);PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、CHOP一抗(货号：ab79483、ab192591、ab169528、ab227593、ab11419,英国Abcam公司);山羊抗兔IgG-HRP、山羊抗小鼠IgG-HRP(货号：GARG80-0500、AS16-3715,艾美捷科技有限公司);BCL2、BAX(货号：ab32124、ab32503,英国Abcam公司);酶标仪(型号：ELx808,美国Bio-Tek公司);倒置荧光显微镜(型号：IX83,仪景通光学科技有限公司);iBright凝胶成像仪(型号：CL750,赛默飞世尔科技有限公司) ......