任海霞 平付敏 牛淑利 郭永泽 李淑霞 王建华 郭晓会 闫华楠 王恩雨 叶东

    肝硬化是多种慢性肝病引起肝损伤的共同病理途径,包括肝细胞变性、坏死、肝实质被纤维化组织和再生结节替代、肝功能丧失等[1],患者晚期出现肝功能衰竭、门静脉高压和多种并发症。从21世纪开始,科学界依据消化管道与肝脏的天然解剖关系,提出了口腔-肠-肝轴理论,揭示了肝脏疾病与口腔和肠道菌群之间的关系。16S rRNA长度约1.5 kb,信息量较大且易于分析,可以体现出细菌菌属的序列及差异[2]。本研究通过16S rRNA基因测序技术分析健康人群和肝硬化食管胃底静脉曲张(CEGV)患者口腔和肠道菌群的不同,探讨口腔和肠道菌群的组成和联系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 本研究实验组(CEGV组)收集2020年6月至2021年8月在河北工程大学附属医院、邯郸市传染病医院收治的经临床、影像学、实验室、内镜等检查手段确诊为CEGV的患者(肝硬化食管胃底静脉曲张诊断参考中华医学会肝病学分会制定的《肝硬化诊治指南》)[3],收集同时期的健康志愿者作为对照组(HC组)。(1)HC组：入选标准：①家族中无肝病患者及与纳入患者无血缘关系;②既往无消化系统疾病、恶性肿瘤等病史;③近期无上呼吸道感染,无口腔疾病及牙龈出血。排除标准：①胃肠道手术史;② 1个月内使用过抗生素或益生菌。(2)CEGV组：入选标准：①肝硬化病因不限且临床资料完整;②可合并腹水。排除标准：①伴其他系统重大疾病及恶性肿瘤;②有牙科病史和口腔检查发现任何有活动性牙龈或牙周病;③合并慢性腹泻、炎症性肠病等可引起肠道菌群紊乱的患者;④有胃肠道手术史者;⑤ 1个月内使用过抗生素及益生菌。所有实验对象对本研究均知情同意,本研究获得河北工程大学附属医院伦理委员会的审核同意。

    1.2 标本采集

    1.2.1 唾液采集：所有研究对象至少在标本收集2 h前不进食,不饮水、不刷牙。收集过程中,受试者手拿无菌、无酶收集管,口含唾液≥1 min,随后使唾液2～5 ml流入试管中,2 h内送至实验室-86℃冰箱保存。

    1.2.2 粪便采集：用粪便取样器留取粪便中段里部50～100 mg样本,每样留存2～3管备份,2 h内放入-86℃超低温冰箱保存,采集管要求无菌、密封,采集过程中避免尿液等污染。

    1.3 DNA提取、16S rRNA基因文库制备、信息分析 将唾液和粪便样本放入裂解液中裂解离心得到样品DNA(起始量≥30 ng,质量要求：无色素等杂质;无降解或轻微降解;体积,容积：15 ～100 μl;浓度：6～100 ng/μl),检测NanoDrop样品浓度和1%琼脂糖凝胶样品完整性 ......