丁兴伟 韩逸青 王晖 李荣

    具有广谱和抗菌活性强等优点的碳青霉烯类抗菌药物,如美罗培南、亚胺培南和厄他培南,是治疗大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌等革兰阴性菌引起感染最有效的抗生素之一,这类细菌约占临床分离株的70%以上。革兰阴性菌广泛分布于自然界,也存在于人的上呼吸道和肠道[1]。同时碳青霉烯类亦可囊括大多数革兰阳性菌及厌氧细菌,是临床治疗耐药细菌导致感染的首选药物之一,也是治疗耐药肺炎克雷伯菌等,根据CHINET耐药数据监测显示,耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的检出率正在逐年提高,使得碳青霉烯类抗生素的总体临床治疗有效性正在下降[2]。本文通过医院HIS信息系统,提取2017至2019年医院碳青霉烯类(美罗培南)的使用强度数据,对比2017至2019年从住院患者标本中分离得到的肺炎克雷伯菌的耐药监测数据,分析差异。使用PCR方法扩增分离出的CRKP的碳青霉烯相关基因,通过用琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis,AGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)了解耐药基因分布和同源性。

    1 资料与方法

    1.1 菌株来源 细菌耐药监测数据由上海市普陀区人民医院和南华大学附属第二医院、检验科微生物室提供,为2017至2019年从住院患者标本中分离得到的肺炎克雷伯菌。通过医院HIS信息系统,提取2017至2019年该院碳青霉烯类抗菌药物的使用数据。同时收集2019年6～12月的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药菌株,其中来自上海普陀区人民医院的CRKP共19株,来自南华大学附属第二医院CRKP 共17株,作耐药基因分析,剔除同一患者同一部位分离的重复菌株。

    1.2 主要试剂

    1.2.1 仪器与设备：法国生物梅里埃生物公司BacT/Alert 3D全自动血培养仪、VITEK-2全自动细菌鉴定仪和相应鉴定卡。

    1.2.2 药敏纸片：①涉及药物包括阿米卡星、多粘菌素B、厄他培南、复方新诺明、环丙沙星、磷霉素、美罗培南、米诺环素、庆大霉素、替加环素、替卡西林/克拉维酸、头孢吡肟、头孢呋辛、头孢美唑、头孢哌酮/舒巴坦、头孢曲松、头孢西丁、头孢唑林、亚胺培南和左氧氟沙星,共20种均购自OXOID公司。②参照2017年美国临床和实验室标准化协会 (CLSI)推荐的药敏试验方法及折点标准进行。采用标准琼脂二倍稀释法测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。取145 μl加入3 ml做卡的药敏,被试菌悬液用无菌棉拭子蘸取菌液,在管壁上挤压去掉多余菌液,菌悬液浓度为0.50～0.63 ......