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    创伤性骨关节炎(traumatic osteoarthritis,TOA)是骨关节炎(osteoarthritis,OA)的一种亚型,发生于关节损伤后,关节软骨磨损、退化变性为TOA的主要病理改变,造成患者膝关节疼痛、活动障碍[1]。诸多证据表明,炎性反应是介导TOA病理过程重要且不可避免的促成因素,其中核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)是介导炎性反应的关键因子,其通过核易位而活化,调控促炎因子表达,诱导炎性发生[2]。蛋白翻译后修饰在NF-κB核易位过程中扮演着重要角色,如经乙酰化、甲基化、磷酸化等,沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)是一种常见的去乙酰化酶,其可诱导NF-κB去乙酰化,从而抑制其核易位,减轻炎性反应[3,4]。而SIRT1在一定程度上受5’磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)的调控[5]。故而AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路被认为是抑制炎性反应的重要靶向信号通路。中医将TOA归属于“骨痹”“痹症”范畴[6]。隔药灸为艾灸的形式之一,其较直接灸火力温和,且可实现艾灸和药物双重作用,适用于诸多慢性疾病的治疗[7,8]。三七又名人参三七,有散瘀活血、消肿止痛的功效,且现代药理学研究显示,三七亦具有显著的抗炎疗效[9]。目前已有研究报道隔三七饼灸对OA取得了较好的疗效[10],但其作用机制仍不清楚。基于上述内容,本研究采用经典Hulth方法复制TOA大鼠模型,观察隔三七饼灸对TOA大鼠软骨损伤的影响,并探究调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路作为其药理机制的可能性。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 8周龄SPF级SD大鼠,雄性,体重280～300 g,购自北京华阜康生物公司[许可证号:SYXK(京)2019-0022]。喂养环境:12 h光/12 h暗交替模式,温度22～26℃,湿度40%～55%,自由摄食、进水。

    1.2 主要试剂 三七粉、艾绒由本院中药房提供;AMPK抑制剂Compound C(MedCheExpress公司);HE染色、番红-固绿染色试剂盒(上海源叶生物公司);一氧化氮(NO)检测试剂盒、RIPA裂解液、核蛋白抽提试剂盒、BCA试剂盒(均碧云天生物公司);白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)Elisa检测试剂盒(均上海酶研生物公司);基质金属蛋白酶(MMP)-1,3 Elisa检测试剂盒(均武汉华美生物工程有限公司);兔源一抗Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ)、AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、SIRT1、乙酰化NF-κB(ac-NF-κB)、anti-Histone H3、anti-GAPDH(均Abcam公司);兔源一抗NF-κB(北京百奥莱博科技公司);山羊抗兔二抗(Absin公司) ......