岳万勇 农国旺 潘光泽 田文梅 张学亮 陈光健 张飞 喻国丹

    炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病,如溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)或克罗恩病。其中,与成人患者相比,UC儿科患者的疾病范围、严重程度和进展情况明显更大、更广[1,2]。尽管目前针对成人UC的外科治疗已经得到充分的研究,但并不完全适用于儿童[3]。因此,为了治愈儿童UC,探究其发病机制至关重要。miRN通过与目标mRNA中的互补序列配对并干扰其稳定性和翻译来调节基因表达,在包括UC在内的多种自身免疫性疾病的发病机制中发挥重要作用[4]。据报道,miR-27a在肿瘤的发生发展中具有重要作用,是一种新型的生物标志物和潜在的肿瘤治疗靶点[5]。此外,有研究证实,miR-27a参与UC的发生发展[6]。然而,对于miR-27a在UC中的调控、作用和靶点的理解仍然有限。在本研究中,假设miR-27a在肠道炎症中具有重要作用,使用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6- trinitro picrylsulfonic acid,TNBS)诱导实验小鼠UC模型[7]。本研究探索miR-27a在TNBS诱导的UC中的作用,并研究miR-27介导的肠道炎症的潜在机制,为从实验室到临床识别和治疗UC提供证据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 (1)小鼠:SPF级幼年雄性C57BL/6小鼠(4周龄,16～20g)购自昆明医科大学,许可证号:SCXK(滇)K2020-0006。本研究符合《实验动物护理和使用指南》。所有涉及动物的实验程序均经昆明医科大学伦理委员会批准。(2)主要试剂:TNBS由Sigma-Aldrich提供,货号:P2297;苏木精-伊红染色试剂盒由武汉赛维尔提供,货号:G1001-500;TUNEL FITC凋亡检测试剂盒(绿色荧光)由碧云天提供,货号:C1098;TRIzol试剂由美国Invitrogen提供,货号:15596-026;髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性检测试剂盒由Abcam提供,货号:ab155458;Reverse Transcription试剂盒由vazyme提供,货号:R323-02;SYBR Green PCR Master Mix由vazyme提供,货号:Q511-03;肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、细胞间黏附分子1(Intercellular Adhesion Moleclar-1,ICAM-1)和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)ELISA试剂盒由Abcam提供,货号:ab46105、ab197742、ab252355、ab208979;PPARγ、SIRT1、NF-κB p65(acetyl K310)和β-actin一抗由英国Abcam提供,货号依次为:ab207297、ab272718、ab189494、ab19870;RIPA裂解缓冲液裂由BOSTER提供,货号:AR0102-100;BCA蛋白浓度测定试剂盒由博士德生物提供,货号:AR0197;ECL化学发光检测试剂盒由新赛美生物提供,货号:P10300;Dual-Glo Luciferase Assay System由美国Promega提供,货号:E2920 ......