周毛仔 陈怡 周进军

    宫颈癌是常见的妇科恶性癌症,其全球范围死亡率和发病率在所有女性癌症位居第四,对女性健康造成严重的威胁,宫颈癌早期发现常用外科手术切除,治疗效果明显,但是70%宫颈癌患者发现时已经处于晚期,一些情况下还伴有转移、侵袭等出现[1,2]。近年来,靶向治疗是当前宫颈癌研究和治疗的热点。环状RNA(circRNA)是非编码RNA分子的一员,具有稳定的环状闭合结构,circRNA被发现具有致癌性和抑制性,对多种人类疾病和癌症至关重要[3,4]。最近的研究发现,circAMOTL1在宫颈癌组织和细胞表达上调,敲低circAMOTL1能抑制宫颈癌细胞的增殖和转移,并诱导细胞的凋亡,通过调控miR-526b/SIK2轴促进宫颈癌恶性发展[5]。circRNA与下游miRNA能相互作用参与肿瘤细胞的发生和发展,miR-379-5p多种癌症中表达下调(如肝癌、非小细胞肺癌等),过表达miR-379-5p能抑制癌细胞的增殖和促进细胞凋亡[6,7]。关于circAMOTL1和miR-379-5p二者间的研究尚不明确,通过在线数据库预测显示circAMOTL1和miR-379-5p存在互补的核苷酸序列,本研究以宫颈癌细胞Caski为研究对象,观察circAMOTL1靶向miR-379-5p的表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料 从本院收集30例宫颈癌患者组织和癌旁组织,经过专家对其病理确认为宫颈癌组织和癌旁组织,将组织放在液氮罐内冷冻保存。所有患者在进行手术前未进行任何化疗或放疗,且患者均签署了患者知情同意书。该研究已经获得了本院伦理委员会同意。

    1.2 细胞与主要试剂 正常宫颈上皮细胞End1/E6E7、宫颈癌细胞SiHa、Caski、HeLa、C33a购自上海细胞库;胎牛血清、DMEM培养基购自美国Hyclone公司;si-NC、si-circAMOTL1、pcDNA、pcDNA-circAMOTL1、anti-miR-NC、anti-miR-379-5p、引物由上海吉玛设计合成;LipofectamineTM2000试剂盒购自上海加科生物科技有限公司;TRIzol试剂盒、逆转录试剂盒、荧光定量试剂盒购自日本TaKaRa公司;MTT试剂盒购自碧云天生物;周期试剂盒、凋亡试剂盒购自江苏凯基生物;CyclinD1抗体、Ki67抗体、Bax抗体、Bcl-2抗体、GAPDH抗体、标记的二抗购自北京奥维亚生物技术有限公司;荧光素酶检测试剂盒购自Promega公司 ......