谢小芳 赵展庆 符妹垂

    心肌梗死后心肌组织出现大面积变性坏死,造成严重的心力衰竭及心率失常,随时危及患者生命[1,2]。持续性缺血缺氧触发的心肌组织强烈炎性级联反应是造成心肌梗死后心功能损伤的主要病理基础,抗炎干预可有效减轻心肌梗死后心肌细胞凋亡和心肌组织损伤,改善心功能[3,4]。研究显示miR-16-5p在缺血性心肌损伤中起着重要的调节作用,下调miR-16-5p表达可有效保护心肌细胞免受缺氧/复氧诱导的损伤[5],抑制Janu激酶2(Janus Kinase 2,JAK2)/信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号激活可抑制缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡,有效保护心肌梗死大鼠心脏[6];另有研究证明,miR-16-5p可调控STAT3表达,进而介导神经系统疾病和糖尿病的发生发展[7],因此下调miR-16-5p/STAT3信号可能是防治心肌梗死后心损伤的有效策略。大黄素具有显著抗炎、抗心肌缺血、抗凋亡特性,能用于心血管疾病的防治[8],可发挥抗氧化应激以及抗凋亡功效而促使缺氧复氧心肌细胞存活[9],还可抑制JAK2/STAT3信号激活并缓解小鼠动脉粥样硬化病变[10],因而推测大黄素可能通过miR-16-5p抑制STAT3而对心肌梗死大鼠发挥保护作用,本文以不同剂量大黄素处理心肌梗死模型大鼠,对此推测做验证。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 Wistar大鼠,体重205～220 g,雄性,7周龄左右,SPF级,购自杭州启真实验动物科技有限公司,合格证号:SCXK(浙)2022-0005。大鼠在屏障环境的动物房内饲养,饲养条件:照明为昼夜12 h/12 h交替,温度22.5～25.5℃、相对湿度55%～65%。

    1.2 主要材料及试剂 miR-16-5p agomir、miR-16-5p agomir阴性对照、miR-16-5p及U6引物由上海吉玛制药技术有限公司提供;大黄素(纯度≥98%,货号E8390)、一步法荧光定量PCR试剂盒(货号T2210)、2,3,5氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl-2H-Tetrazolium Chloride,TTC)染色液(2%,货号G3005),北京索莱宝科技有限公司;Trizol试剂(货号:AHF1813A),美国Invitrogen公司;大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒(货号ab236712)、HE染色试剂盒(货号ab245880)、大鼠白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)ELISA试剂盒(货号ab255730)、TUNEL染色试剂盒(货号ab206386)、兔抗大鼠Anti-β-actin一抗(货号ab8227)、兔源抗大鼠Anti-p-STAT3抗体(货号ab76315)、兔源抗大鼠Anti-Caspase-3抗体(货号ab184787)、兔源抗大鼠Anti-STAT3抗体(货号ab68153)、辣根过氧化物酶标记小鼠抗兔二抗(货号ab99697)、兔源抗大鼠Anti-Bax抗体(货号ab32503),美国Abcam公司等 ......