张翔 张博方

    急性心肌梗死(AMI)是冠状动脉疾病最严重的表现形式,死亡率超过20%,是全球范围内导致死亡最主要的疾病之一[1],通过静脉溶栓、经皮冠状动脉介入治疗迅速开通梗死相关血管,恢复缺血区域血流的灌注被认为是治疗AMI的重要治疗措施。然而,试验表明,缺血再灌注会引起心肌细胞额外的损伤,称之为心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)[2]。MI/RI机制尚不明确,目前研究者已经提出了许多潜在的病理生理机制,如钙离子超载、氧自由基增加、炎症、细胞凋亡等[3]。其中,细胞凋亡是一种经典的程序性细胞死亡,生理状态下可去除不必要的细胞,在防御机制中发挥积极的作用。然而,在特殊病理状态的刺激下,过度的细胞凋亡会对器官造成病理性损害[4]。研究证实,细胞凋亡是梗死心肌细胞死亡的主要形式,在MI/RI过程中,低氧环境会激活细胞凋亡相关信号通路,且其进程会因再灌注而进一步加快[5]。因此,抑制细胞凋亡可能是缓解MI/RI的一种有效治疗策略。异莲心碱是莲子心提取物莲心总碱的主要成分之一,其药理作用广泛,有抗氧化、抗纤维化、抗肿瘤等作用[6,7]。研究表明,异莲心碱在心血管疾病的治疗中能够发挥积极作用,具有抗心律失常、降压、抗血栓形成等作用[8-10]。另有研究证实,异莲心碱在脑缺血再灌注损伤的病理过程中起到关键作用,发现异莲心碱通过其抗氧化作用减轻小鼠前脑缺血再灌注损伤[11]。因此本研究在离体条件下建立心肌细胞H/R模型[12],从细胞层面探究异莲心碱对H/R引起的心肌损伤的作用及机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 1～3 d龄SD大鼠乳鼠,SPF级,雌雄不限,由武汉大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK(鄂)2019-0013。

    1.2 试剂与仪器 (1)试剂:异莲心碱(纯度:99.8%,批号:must-21100923,成都曼思特生物科技有限公司),磷酸缓冲盐溶液(PBS,P1022)、DMEM培养基(31600)、标准胎牛血清(S9020),北京索莱宝科技有限公司;LDH试剂盒(A020-2-2)、CK-MB试剂盒(H197-1-1)、Tunel试剂盒(G001-4-2),南京建成生物工程研究所;CCK-8试剂盒(C0038),DAPI染色液(C1006),上海碧云天生物技术有限公司;α-actinin抗体(ab137346,1∶1 000)、Bcl-2抗体(ab182858,1∶2 000)、Bax抗体(ab32503,1∶4 000),Caspase-3抗体(ab32351,1∶5 000),Nrf2抗体(ab62352,1∶2 000),HO-1抗体(ab52947,1∶2000),英国Abcam ......