汤晓青 郭玺 万焱 王洁 徐斌 陈瑾 张洁 付海艳 罗煜

    调查显示,全球新增约84万例肝癌病例和78万例肝癌死亡病例,仅中国就占病例和死亡总数的50%左右[1,2]。尽管我国肝癌的发病率和死亡率呈显著下降趋势,但庞大的人口基数和快速的人口增长,仍导致新发肝癌患者大量增加[3]。在临床中首选手术治疗,结合放化疗可抑制癌症恶化、延长患者生存期,但因耐药性的产生使疗效不十分满意。中国传统医学中的中药包括动物中药、植物中药和矿物质中药,均为天然产物,以绿色健康低毒著称[4]。复方中药肝清宁是一种我国的民间药方,君药土鳖虫、水蛭,臣药三七、甲珠、鸡内金等均参与肝癌的治疗[5,6],但是该方剂的临床效果研究笔者所见甚少。本研究旨在探讨肝清宁对肝癌细胞、肿瘤恶化的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 (1)实验动物:5只4周龄的SPF裸鼠(18±1)g购自湖南斯莱克景达实验动物公司。实验动物许可证号:SCXK(湘)2019-0004。(2)试剂、耗材:人肝癌细胞MHCC97购自美国ATCC;DMEM培养基购自美国;复方中药肝清宁(土鳖虫30 g、水蛭20 g、三七30 g、甲珠20 g、鸡内金30 g、紫河车45 g、党参30 g、黄芪30 g、茯苓30 g、白术30 g、郁金30 g)由我院药剂室制备。5氟尿嘧啶(5-Fu HPLC>99%,货号:51-21-8)购自西安齐岳生物科技有限公司;CCK8试剂盒购自日本同仁;Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自上海碧云天;Cleaved caspase-3、Cleaved PARP、MMP-3、MMP-9抗体购自上海艾博抗;Transwell小室购自美国corning;ECL发光试剂盒购自上海翌圣生物科技公司;Gallios流式细胞仪购自美国贝克曼库尔特。

    1.2 方法

    1.2.1 MHCC97细胞的培养:10%胎牛血清+1%青链霉素的DMEM培养液,在37℃、5%CO2的饱和湿度恒温细胞培养箱中培养48 h,更换新培养基,传代培养 ......