谈俊 高巍巍 滕志鹏 王广 代震宇 李炜

    关节炎导致慢性疼痛甚至致残,对人们的生活造成严重负担[1]。关节炎的特征是疼痛、关节肿胀、畸形和功能丧失[2]。但不明确炎性疼痛的发生机制,本研究利用完全弗氏佐剂(CFA)诱导炎性疼痛模型[3],探讨关节炎性疼痛的机制。P300蛋白是组蛋白乙酰转移酶(HAT)家族的关键成员,在真核生物中参与基因表达的调控。研究表明,慢性压迫损伤(CCI)引起的神经性疼痛中P300激活增加[4],并依赖于钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)的磷酸化[5]。研究表明,细胞内Ca2+相关级联反应引起的受体损伤和敏化可能是神经性疼痛的神经生理机制[6],其中CaMK Ⅱ的表达变化在其中扮演重要作用[7,8]。CaMK Ⅱ参与外周和中枢敏化过程[6,9]。还有研究表明,抑制CaMK Ⅱ可以改善CCI模型动物的疼痛敏化[6]。但是目前仍无关于P300与其依赖的CaMK Ⅱ的磷酸化调节方式在关节炎性痛模型中扮演的角色。本文假设P300通过抑制磷酸化的CaMK Ⅱ可能与关节炎性疼痛和抗炎作用有关。因此,本研究构建CFA诱导关节炎大鼠模型,评价鞘内注射P300的沉默质粒(siRNA-P300)对关节炎大鼠痛觉、炎性反应的影响,并探讨CaMK Ⅱ磷酸化的作用和机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 大鼠来源于重庆医科大学实验动物中心。二甲基亚砜(DMSO)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-6的ELISA试剂盒及CFA购于上海碧云天公司;Von Frey TM动态足底触觉测量仪购于上海玉研科学仪器有限公司;辐射热刺痛仪购于四川科仪诚科技有限公司。P300、P物质(SP)、c-fos,p-CaMK Ⅱ的抗体购于美国Abcam公司。

    1.2 方法

    1.2.1 动物的造模、给药与分组:3月龄雄性SD大鼠60只,体重181～233 g。实验期间动物饲养于重庆医科大学动物房,每日光照约12 h,自由饮食和饮水。所有大鼠饲养2周后进入实验。将大鼠随机分为A、B、C、D、E、F共6组(n=10):A组:仅为大鼠左后肢踝关节注射等体积0.9%氯化钠溶液作为对照组。B组:左后肢踝关节注射完全弗氏佐剂(CFA)诱导佐剂性关节炎模型大鼠;C组:鞘内注射阴性对照(siRNA-NC),其余操作与D组一致;D组:左后肢踝关节注射CFA诱导佐剂性关节炎模型大鼠,制备前10 min鞘内注射用于敲低P300的小干扰RNA(siRNA-P300);E组:鞘内联合注射siRNA-P300和油酸的溶剂二甲基亚砜(DMSO),其余操作与D组一致;F组:鞘内联合注射siRNA-P300和油酸(CaMKⅡ的激活剂),其余操作与D组一致 ......