王洪福 贾媛 刘楠 尹凯 齐文千 孙福祥

    前列腺癌是全世界男性中最常见的恶性肿瘤之一,据估计2020年全球报告的新病例为64万例,死亡人数为8万多[1]。前列腺癌患者大多接受雄激素剥夺治疗,尽管初始反应率很高,但10%～20%的患者出现去势抵抗性前列腺癌,导致治疗失败[2,3]。因此,探索新的治疗靶点对前列腺癌的治疗意义重大。两种类型的非编码RNA(ncRNA)对表观遗传和翻译后调控都很重要。研究表明,长非编码RNA(IncRNA)在表观遗传调控中发挥作用[4]。长度>200个核苷酸的IncRNA定义为IncRNA,它保持RNA分子常见的经典poly-A尾和5’-帽。IncRNA已在许多组织类型中发现,并在发育过程中的特定时间表达。出于这个原因,IncRNA在人类癌症的发病机制和其他生理过程中可能是必不可少的[5]。与IncRNA类似,microRNA(miRNA)在癌症中得到了很好的表征。与IncRNA相比,miRNA相对较短(定义为长度为19～25个核苷酸)。除了蛋白质编码调控外,这两种类型的ncRNA也与转录后调控有关。LncRNAs和miRNAs被认为是相互影响的,从而产生了一层额外的调控复杂性[6]。例如,GAS5通过与miR-145结合再前列腺癌的进展中发挥重要调控作用[7]。本研究拟探讨长链非编码RNACCAT1靶向调控miR-377对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响,为前列腺癌的治疗提供依据。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2020年1月至2021年12月本院行手术治疗的前列腺癌78例为病理组,同时获取78例相邻的非恶性组织标本为癌旁组(≥3 cm)。患者年龄53～80岁,平均年龄(77.2±5.3)岁。所有组织标本经病理检查确认。获取样本后冷冻于液氮。该研究经本院医学伦理委员会批准,并获得患者书面知情同意书。

    1.2 纳入与排除标准 (1)纳入标准:①病理检查确诊的前列腺癌患者;②病历完整患者。(2)排除标准:①被诊断患有其他疾病的患者;②治疗期间转入其他医院的患者;③随访期间因其他原因死亡的患者。

    1.3 主要试剂与仪器 miRNeasy Mini 试剂盒(Qiagen,Inc,USA,批号;65489),TaqMan MicroRNA Reverse Transcription试剂盒(Thermo Fisher Scientific Inc,USA,批号;302158),TRIzol试剂(Invitrogen,批号:MN-20148),MMLV Reverse Transcriptase(中国碧云天生物科技,批号:20158),1st-链 cDNA 合成试剂盒(Lucigen Corporation,USA,批号:520158),SYBR?Green Real-Time PCR Master Mix(Thermo Fisher Scientific,批号:521489),Dulbecco改良Eagle培养基(中国碧云天生物,批号:526985),10%胎牛血清,青霉素、链霉素(美国默克生物科技,批号:51489、41555、96581),CCK-8 试剂盒(Dojindo Molecular Technologies,Japan,批号:521458),Annexin V-FITC、碘化丙啶(PI)(Dojindo,Kumamoto,Japan,批号:201596、30254),BD Biosciences 2 Laser 4 Color FacsCalibur 流式细胞仪(BD Biosciences,Franklin Lakes,NJ,USA),BD Paint-A-GateTMPro软件(BD Biosciences),trawnswell小室、Matrigel凝胶(美国BD Biosciences,批号254896、203658),UI-3265倒置显微镜(日本奥林巴斯),蛋白质提取试剂盒(中国Solarbio,批号:FG-4586.36),二辛可宁酸蛋白质测定试剂盒(中国Beyotime,批号:NM-32589),12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(美国sigma,批号:SX-201558),聚偏二氟乙烯膜(美国Pall Corporation,批号:VB-89655),抗RUNX1、GAPDH抗体的特异性一抗(ab96587、20158、3258;英国Abcam,均为1∶1 000稀释),辣根过氧化物酶偶联二抗(ab215;英国Abcam,1∶5 000稀释),化学发光试剂(ECL)试剂盒(中国Beyotime,批号:BO-32569) ......