金曼 王彤辉 任小飞 李淼

    数据显示,肺癌死亡人数占癌症死亡人数的20%,其死亡率在所有类型的肿瘤中排第一位[1]。因此,阐明肺癌进展的潜在机制,并确定肺癌的潜在生物标志物和治疗靶点迫在眉睫。环状RNA(circRNA)是一种具有内源性和保守性的非编码RNA,通过反向剪接形成共价闭合的连续环,更稳定可以用作有效诊断和治疗癌症的生物标志物[2,3]。Tao等[4]发现,circCPA4敲低可以在体外抑制细胞集落形成、迁移、侵袭、细胞周期进程,并加速肺癌细胞的凋亡,且circCPA4缺乏可以抑制肺癌小鼠肿瘤生长。研究发现CircRNA-miRNA-mRNA 信号轴调节肺癌发展进程[5]。且Sun等[6]发现下调miR-377-3p显著加速非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的体外生长和转移以及体内肿瘤的生长,而上调GGA3促进NSCLC细胞增殖[7]。本研究主要探究CircCPA4对肺癌细胞增殖、凋亡以及EMT的影响及其作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 选择2020年8月至2022年10月在我院就诊的20例肺癌患者肺癌组织及其相邻正常组织样本。组织样品保存在-80℃冰箱。受试者均签署书面知情同意书,本研究已获得医院伦理委员会的批准。人肺癌细胞A549购自厦门逸漠生物科技有限公司;人正常肺上皮细胞BEAS-2B购自深圳市豪地华拓生物科技有限公司;si-NC、si-CircCPA4、inhibitor NC、miR-377-3p inhibitor购自上海生工;CCK-8细胞增殖试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司;双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自无锡云萃生物科技有限公司;Annexin V-FITC/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒购自弗元(上海)生物科技有限公司;GGA3、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin抗体购自Abcam。

    1.2 细胞培养及分组 (1)A549细胞接种于Dulbecco的改良DMEM培养基中,培养基含有10%胎牛血清,将A549细胞在37℃、含有5%CO2的细胞培养箱中培养。(2)待A549细胞生长至70%左右,根据转染试剂盒将si-NC、si-CircCPA4、si-CircCPA4+inhibitor NC、si-CircCPA4+miR-377-3p inhibitor分别转染至A549细胞,命名为si-NC组、si-CircCPA4组、si-CircCPA4+inhibitor NC组、si-CircCPA4+miR-377-3p inhibitor 组,另取未做任何处理的A549细胞记为NC组 ......