张琳萍 姚筱 朱燕亭 金刚

    糖尿病肾病的发生与遗传、糖代谢异常、免疫炎症、肾小球高灌注等因素存在联系,其临床病理变化为足突融合、肾小球肥大、基底膜增厚、肾小管肥大等,随病情的发展可出现肾功能丧失,对患者生命安全构成严重威胁[1-3]。miR-21是一种与肺癌、肾癌、心血管疾病存在密切联系的微小RNA家族成员,对血管内皮细胞功能具有调控作用,且可参与脏器纤维化[4]。TLR4/NF-κB是在高血压、心肌缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化等多种心血管疾病中均呈异常激活的信号通路,可参与免疫炎症、细胞增殖分化、氧化应激等过程[5]。基于此,本文研究中基于TLR4/NF-κB信号通路探究沉默miR-21对糖尿病肾病的干预效果,以期为糖尿病肾病临床诊治提供借鉴。

    1 材料与方法

    1.1 动物 选取45只SPF级Wistar大鼠,体重220-260g,由济南金丰实验动物有限公司提供,动物许可证号:SYXK(鲁) 2019 0019,所有大鼠在无病原菌、相对湿度、室温分别为50%、23℃的笼子中进行喂养,所使用的水、食物均经高温高压杀毒,适应性喂养7 d,本试验操作均参照动物试验伦理要求的相关规定,且经我院伦理委员会批准同意。

    1.2 方法

    1.2.1 miR-21慢病毒载体构建:通过GenBanK查找序列获得LPL基因序列,构建miR-21过表达转染质粒、miR-21沉默转染质粒,由上海吉玛公司设计并合成,并做慢病毒滴度测定(病毒滴度为1×109TU/ml)。

    1.2.2 分组与建模:在适应性喂养7d后选取45只大鼠,10只作为空白组,其余35只参照孙李永眷等[6]建立糖尿病肾病模型,于麻醉后将建模大鼠右侧肾脏切除,术前需禁食10 h,手术完成后给予青霉素预防感染,继续喂养14 d,给予腹腔注射链脲佐菌素(30 mg/kg),连续注射3d,以血糖水平、蛋白含量分别为2 g/L、30 mg/24 h为建模成功,最终有30只建模成功,将建模成功的30只大鼠分为模型组、上调组、下调组各10只 ......