肖慧英 刘改文 张改梅 刘君 赵文华 乔娟

    宫颈癌占所有女性生殖系统恶性肿瘤发病率和死亡率的第四位。2018年,有57万例左右宫颈癌新发病例,占所有肿瘤新发病例的3.2%,有31万例左右宫颈癌死亡病例,占所有肿瘤死亡病例3.3%,严重威胁女性患者的生命健康[1]。手术是早期宫颈癌的主要治疗方法,预后相对较好,手术与放疗和化学疗法联合,通常用于中晚期阶段的宫颈癌治疗,预后通常较差。研究发现,30%以上的宫颈癌病例确诊时处于中晚期阶段[2]。宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)是宫颈癌最常见的组织学类型,CSCC占所有宫颈癌类型的85%以上[2],因此研究其发生发展机制对于改善CSCC患者预后具有重要作用。研究报道Kynurenine途径参与调控恶性肿瘤中的免疫微环境,而色氨酸2,3-双加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,TDO2)是Kynurenine途径中第一步代谢过程中的限制酶[3]。大量研究集中在研究TDO2在人类恶性肿瘤中诱导免疫抑制作用中的作用并且其在免疫调节中的关键作用[4],但是新近研究发现TDO2可以通过调控其他信号途径促进肿瘤的恶性进展,在结直肠癌中TDO2通过促进KYNU-AhR(芳基烃受体)信号通路促进肿瘤的进展[5],在肝细胞癌中TDO2通过激活wnt信号通路促进肿瘤细胞侵袭和转移能力[6]。但是TDO2 在CSCC 中的作用尚不清楚,因此本文对此进行了研究报道。

    1 材料与方法

    1.1 材料 收集2015年4月至2017年2月入住我院行手术切除的CSCC组织和其配对的癌旁组织样本(距离肿瘤组织3 cm内的非肿瘤组织)72例,要求CSCC患者符合以下标准:(1)经两位医生诊断为CSCC;(2)手术前未进行放、化疗或靶向治疗等任何形式的治疗;(3)具备完整病理资料,包括年龄、肿瘤大小、肿瘤分级、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和FIGO分期、KI67指数;(4)具有术后5年的随访资料;(5)具有患者或家属签署的知情同意书。排除标准:(1)合并其它器官恶性肿瘤;(2)患有性病等传染病。本研究通过了我院伦理委员会的审查,并根据世界医学协会的赫尔辛基宣言进行。

    1.2 实验试剂 甲醛、无水酒精及二甲苯购自广东中海南联能源有限公司;DAKO免疫组化检测试剂盒购自丹麦;枸橼酸钠抗原修复液购和BCA蛋白浓度检测试剂盒均购自美国Thermo公司;PARP蛋白裂解试剂购自北京索莱宝试剂公司;DMEM-F12培养基、胎牛血清和青霉素/链霉素双抗购自美国Gibco试剂公司;CSCC细胞系SiHa购自美国ATCC细胞库;TDO2 siRNA购自上海瑞博试剂有限公司;Lip2000购自美国Invitrogen公司;PVDF膜购自上海优宁维生物科技股份有限公司;TDO2、PI3K、pPI3K、AKT、pAKT一抗和GAPDH一抗抗体购自英国Abcam公司;ECL化学发光试剂盒购自北京百奥莱博公司;CCK8试剂购自美国sigma公司;Transwell小室购自美国coring公司 ......