周洋 美丽巴努·玉素甫 陈婷妍

    年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,ARMD)是一种复杂的眼部疾病,是老年人群不可避免的眼部问题。ARMD多发于>50岁的老年人群,是导致老年人失明的重要原因之一。目前ARMD的发病机制尚不明确,但是已有研究表明,ARMD发病与氧化应激、炎症、自噬、凋亡等相关[1-3]。视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)位于脉络膜与视网膜神经上皮层之间,容易受到氧化应激的影响,导致细胞内自噬再循环和降解减少,进一步诱导炎症的发生[4,5]。因此,改善RPE的病理状态对于ARMD的治疗至关重要。谷氨酰胺酶1(glutaminase1,GLS1)是谷氨酰胺-谷氨酸循环途径中的限速酶,可通过分解谷氨酰胺而提供细胞快速增殖所需的重要能量[6]。Johmura等[7]研究表明,GLS1是抑制衰老的重要靶点,GLS1分解谷氨酰胺产生的氨中和了衰老细胞中的酸中毒,使得衰老细胞死亡趋于正常化。Liu等[8]研究表明,GLS1可调控肠癌的自噬。GLS1对ARMD的影响尚无探究,本文通过H2O2诱导视网膜色素上皮细胞ARPE-19的氧化应激,探究了GLS1对H2O2诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬和凋亡的影响,旨在为ARMD的临床治疗提供帮助。

    1 材料与方法

    1.1 材料 视网膜色素上皮细胞ARPE-19(购自中科院上海细胞库);过氧化氢H2O2(购自南京化学试剂有限公司);Lipofectamine 2000试剂盒(购自赛默飞世尔科技有限公司);CCK-8试剂盒(购自沈阳万类生物科技有限公司);细胞凋亡检测试剂盒(购自沈阳万类生物科技有限公司);活性氧 (reactive oxygen species,ROS) 检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒(购自购自上海碧云天生物技术有限公司);Nrf2、HO-1、LC3-Ⅱ、p62、GAPDH、山羊抗兔IgG(购自Cell Signaling Technology 公司)。

    1.2 ARPE-19细胞培养与H2O2诱导

    1.2.1 取液氮保存的ARPE-19细胞,于37℃水浴锅中迅速解冻,然后将细胞悬液转移至离心管中,1 000 r/min离心5 min,收集细胞沉淀,用10 ml的含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬,然后转移至细胞培养皿中,细胞培养皿中置于37℃,5%CO2细胞培养箱中,细胞隔天更换培养基,细胞生长至汇合度达80%时进行细胞传代 ......