李畅 范荣 李东波 周威 黄玉娥

    骨折的修复是一个再生过程,包括血管生成、干细胞分化、成骨和软骨形成[1]。而5%～10%的骨折会导致愈合延迟或不愈合[2],这两种情况都需要反复治疗,并且对生活质量产生重大影响。骨折的治疗比骨折更困难。手术是主要的临床治疗方法。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一种具有多向分化潜能、免疫调节作用和能进行自我更新的多能干细胞等[3]。其中,骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)能够分化为成骨细胞、表皮细胞、脂肪细胞等多种细胞谱系[4,5]。外泌体(exosomes)是正常生理和病理条件下细胞间通讯的重要参与者,被证明在组织修复中具有重要作用[6]。这些30～150 nm的小颗粒被大多数细胞通过与质膜融合而分泌到细胞外环境中[7]。当将外泌体施用于异种动物时,它们不会诱导明显的免疫反应。脂质体膜可以保护外泌体的内容物免受破坏。外泌体上的特定表面配体可以与靶细胞结合,使外泌体将RNA、蛋白质或细胞因子传递到靶细胞中以刺激特定的生物学功能[8]。本实验研究骨髓间充质干细胞来源外泌体对大鼠骨折是否具有促进骨愈合作用,并探究成骨作用的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物:雄性Wistar大鼠(3周龄)和成年雄性Wistar大鼠(12周龄,250～300 g)由海南药物研究所有限责任公司提供[动物使用合格证:SYXK(琼)2013-0022]。实验大鼠按照实验标准饲养于动物房中,实验动物设计通过伦理委员会审查。

    1.1.2 试剂:Percoll分离液、PBS、茜素红S和油红O购自美国Sigma公司。胎牛血清和DMEM/F12培养基购自美国Gibco公司。CD45-PE、CD29-FITC、CD90-FITC、CD45-PE、CD117-APC、CD63和CD81抗体购自美国BD Biosciences公司。BMP2、Smad1、Runx2、IgG和GAPDH抗体购自美国Cell Signaling Technology公司 ......