王梅 谭金枚

    胰岛β细胞质量和功能的逐渐下降是2型糖尿病的关键原因[1]。β细胞质量和功能对于维持葡萄糖稳态至关重要,而葡萄糖稳态受损会导致糖尿病的进展[2]。但是,β细胞功能和质量的持续丧失无法通过现有的治疗干预方案(节食、运动,甚至降血糖药物)停止和逆转[3]。因此,保护胰岛β细胞是预防糖尿病的有效途径。炎症是β细胞功能障碍的病理组成部分,炎性细胞因子的升高可能会导致β细胞异常[1]。大量的非编码RNA,如环状RNA(circular RNA,circRNA)和微小RNA(microRNA,miRNA)参与各种疾病。与线性RNA不同,circRNA是一类具有封闭结构、高稳定性的新型非编码RNA[4]。许多学者已经鉴定并揭示了circRNA在包括糖尿病在内的许多疾病中扮演的关键角色[5,6]。一些circRNA可以干扰miRNA及其靶基因水平,从而以多种方式在多种疾病中发挥作用。Qiu等[7]首次研究报告了一种来自3q26.2位点的新型circRNA,circPRKCI,它在肺腺癌组织中过度表达,充当miR-545和miR-589的海绵促进肺腺癌的增殖和肿瘤发生。此外,circPRKCI通过靶向不同的miRNA,减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的HK2细胞[7]或过氧化氢诱导的神经元细胞[8]损伤。许多miRNA已被证明在糖尿病病理学中至关重要[9]。据报道,缺血再灌注损伤后心肌细胞中miR-448上调[10],提示miR-448与细胞损伤有关。然而,迄今为止,circPRKCI和miR-448对高脂高糖诱导的胰岛β细胞损伤的影响和功能机制笔者尚未见报道。鉴于此,本研究假设circPRKCI可以通过与miR-448的相互作用来缓解糖尿病胰岛β细胞损伤,利用高脂高糖损伤胰岛β细胞的体外模型,对circPRKCI和miR-448进行上调或下调以鉴定二者在糖尿病胰岛β细胞损伤中的特定功能和作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料 小鼠胰岛β细胞株MIN6(上海信裕),棕榈酸、Annexin V-FITC/碘化丙啶(propidium iodide,PI)细胞凋亡检测试剂盒(美国Sigma),circPRKCI过表达载体(pcDNA-circPRKCI)、pcDNA、circPRKCI沉默载体(si-circPRKCI)、si-NC、anti-miR-NC、miR-448抑制剂(anti-miR-488)、miR-NC、miR-448模拟物(上海GenePharma),抗鼠活化-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-cysteinyl aspartate specific proteinase,cleaved-caspase)3抗体、cleaved-caspase9抗体、IgG二抗(美国Abcam),Mir-miRNA First-Strand Synthesis Kit、PrimeScript RT试剂盒、SYBR Premix Ex Taq TM Ⅱ试剂盒(大连Takara) ......