宋浩杰 宋琴 施为建 吕成伟 蒋凤莲 王丽 李全泳

    前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤,在欧美地区的发病率和死亡率位居男性恶性肿瘤的前三位[1]。近几年来,我国前列腺癌的发病率和死亡率呈现上升趋势,前列腺癌发现时往往以中晚期为主,总体治疗效果仍不理想[2],亟需探索新的治疗手段。而以树突状细胞(dendritic cells,DC)为基础的肿瘤疫苗是前列腺癌治疗中极有希望取得突破的疗法[3]。前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)是前列腺癌的特异性标志物,是一种非常理想的前列腺癌靶抗原。实验研究表明:以重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)为载体,将前列腺特异性抗原(PSA)基因负载DC,在体外能够诱导较强的PSA抗原特异性的抗肿瘤效应[4]。但成熟DC存在宿主自身抗原特异性免疫耐受[5],限制了DC疫苗的临床疗效。如何促进DC成熟、共刺激和抗原递呈能力以及打破对自身肿瘤相关抗原的免疫耐受是目前DC肿瘤疫苗成功的关键。细胞因子信号抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1) 是一个负性调控分子家族成员,对多种细胞因子的信号转导起负调控作用。研究表明,SOCS1可以调控DC及T细胞的分化、成熟和活化,对DC的免疫负反馈调节起重要作用[6]。我们前期的研究证实:沉默人DC的SOCS1表达,可以促进DC的成熟和活化,促进炎性细胞因子的分泌,减少抑制性细胞因子的分泌,参与免疫调控,有利于促进DC刺激Th1型免疫反应[7]。本研究探索应用重组腺相关病毒(rAAV)介导的RNA干扰技术,沉默人DC的 SOCS1基因的表达,联合携带PSA基因的rAAV/PSA感染DC提供持续的抗原提呈,制备新型DC疫苗,以期促进DC突破宿主水平自身抗原特异性免疫耐受,从而有效激发针对前列腺癌的特异性免疫应答,为临床前列腺癌的免疫治疗提供新的策略。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 淋巴细胞分层液(Ficoll-Hypaque)购自天津血液研究所;重组人白细胞介素 2(IL-2)、重组人白细胞介素4(IL-4)、重组人白细胞介素 7(IL-7)、重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)购自Sigma 公司;RPMI-1640培养基、AIM-V 培养基购自Invitrogen公司;DMEM培养基购自Gibco公司;RT-PCR试剂盒购自 Takara公司;Anti-SOCS1抗体购自 Millipore公司 ......