王晓燕 孟建辉

    糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy, DCM)是糖尿病患者在没有冠心病、高血压和心脏瓣膜病等情况下,存在的心脏结构和功能异常[1-3]。DCM主要以心肌细胞凋亡、心肌间质纤维化、左心室舒张和收缩功能障碍等为特征[4,5]。DCM是糖尿病患者心源性猝死和死亡的主要原因[6]。因此,DCM的预防和治疗是亟待解决的难题。目前DCM的发病机制仍不清楚,心肌细胞凋亡是促进DCM进展的主要危险因素[7],抑制心肌细胞凋亡有可能成为改善心功能的有效治疗方法。MicroRNAs (miRNAs)是长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA,通过抑制翻译或裂解靶RNA来调节转录后的基因表达。以往的研究表明miRNAs参与了多种生物学过程,包括细胞增殖、分化、转移、凋亡、糖代谢和脂肪代谢等。近期有研究表明miRNAs在DCM中的表达水平发生改变[8],并形成复杂的网络[9,10],miRNAs通过参与转录和转录后调节影响DCM的心脏功能和重构。目前miR-29家族在糖尿病、心血管疾病中的研究日益增多,这些研究主要集中在糖尿病胰岛素抵抗、糖代谢异常、脂代谢异常和全身炎性反应等方面。笔者发现miR-29a是否通过心肌细胞凋亡途径参与了糖尿病心肌病的发病机制,尚不清楚。研究起始时间为2020年10月,本研究采用高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲霉素(streptozotocin, STZ)的方法,成功建立DCM大鼠模型,探讨miR-29a在DCM大鼠心肌细胞凋亡中的作用及其对心功能的影响,从而为DCM的诊治提供新的靶点。

    1 材料与方法

    1.1 实验试剂 miR-29引物、ReverAid First Strand cDNA Synthesis由广州锐博公司合成。Rrizol Reagent 购于美国Invitrogen公司。RNAiso Plus、SYBR Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒、蛋白分子量标准购于TaKaRa公司。RIPA蛋白抽提试剂盒购于碧云天生物研究所。磷酸酶抑制剂混合物、蛋白酶抑制剂混合物购于凯基生物公司。FITC Annexin V细胞凋亡检测试剂盒I购于美国BD公司。羊抗鼠IgG-HRP购于北京中杉金桥生物公司。GAPDH抗体购于北京赛诺博生物技术中心。Bcl-2、Mcl-1、Bax、Caspase-3和Bak1 抗体均购于Cell signaling Technology Inc。

    1.2 实验动物 雄性、10周龄、Sprague-Dawley(SD)大鼠(体重200±15 g),由河北医科大学实验动物中心提供 ......